Paulina Krzemińska 16.11.2011r.

Opis doświadczenia 5:

Badanie i oznaczanie aktywności amylazy ślinowej.

Do poniższych doświadczeń przygotowałam roztwór 2ml mojej śliny rozcieńczony do 10ml.

1. Stopniowy rozkład skrobi przez amylazę ślinową:

Zasada: Odczynnikiem wskazującym zawartość skrobi w roztworze jest roztwór jodu w jodku potasu. Na podstawie zabarwienia tegoż odczynnika możemy wywnioskować w których probówkach skrobia została do końca strawiona, a w których jeszcze nie. Pomiary przeprowadzałam co 30 sekund.

Obserwacje: 1 – granatowa, 2 – fioletowa, 3 – pomarańczowa, 4 – żółtopomarańczowa, 5 – jasnożółta, 6 – jasnożółta.

Wnioski: Trawienie skrobi w moich probówkach odbywa się relatywnie szybko; skrobia nie została zupełnie wykryta już w piątej probówce. Amylaza ma dużą aktywność.

1. Określanie optymalnego pH dla aktywności amylazy:

Zasada: Dla sześciu wartości pH sprawdziłam, przy której wartości trawienie skrobi zachodzi najszybciej.

Obserwacje: Granatowe zabarwienie skrobi (pochodzące od jodu) zniknęło najszybciej w pH = 6,5. Wyższe i niższe wartości pH powodowały wolniejszy zanik granatowej barwy, natomiast dla pH = 5 skrobia miała cały czas granatowy kolor.

Wnioski: Optymalnym pH dla amylazy jest wartość 6,5.

1. Określenie optymalnej temperatury dla aktywności amylazy:

Zasada: Pomiary przeprowadziłam dla 3 różnych temperatur (temp. pokojowa: 20^oC, 37^oC oraz 45^oC) i sprawdzałam dla której wartości reakcja zachodzi najszybciej.

Obserwacje: Granatowe zabarwienie najszybciej znika dla temperatury 37^oC.

Wnioski: Amylaza ślinowa jest najaktywniejsza w temperaturze 37^oC.

1. Oznaczenie aktywności amylazy ślinowej metodą Wohlgemuta:

Pomiar przeprowadziłam w pH i temperaturze wyznaczonych w poprzednich punktach, które odpowiadają największej aktywności amylazy. Polegał on na przygotowaniu coraz bardziej rozcieńczonego roztworu śliny poprzez dodawanie dwóch ml roztworu z jednej probówki do następnej. Następnie po kilku minutach inkubowania roztworu dodałam do każdej probówki 2 ml skrobi i pozostawiłam w temperaturze 37^oC na pół godziny.

Stężenia amylazy w kolejnych probówkach i ich zabarwienie po dodaniu jodu w jodku potasu:

Lp.	% zawartości amylazy	Zabarwienie po dodaniu skrobi
1	20	Bezbarwne
2	10	Bezbarwne
3	5	Bezbarwne
4	2,5	Lekko żółte
5	1,25	Fioletowe
6	0,625	Granatowe
7	0,313	Granatowe
8	0,156	Granatowe
9	0,078	Granatowe
10	0,039	Granatowe

Aby obliczyć ilość 0,1%-owego roztworu skrobi rozłożonego w czasie 30 min przez 1 ml śliny ułożyłam proporcje:

2[ml] −  0, 625 %

x[ml] − 100%

Po wymnożeniu „na krzyż” otrzymałam wartość 320 ml, jest to objętość amylazy, którą może rozłożyć 1ml śliny.