Sprawozdanie
Wojciech Różański, Łukasz Mitusiński; biotechnologia; rok I; semestr II; aut1; sekcja 8.
Data wykonania: 04.03.2011
Ćwiczenie 2: Obserwacja komórek w mikroskopie świetlnym.
Cel ćwiczenia: Określenie żywotności komórek raka jelita grubego (HCT-116) przy pomocy roztworu błękitu trypanowego oraz przy pomocy roztworu erytrozyny.
Przebieg ćwiczenia:
Pobrano pipetą z probówki nr.1 30µl zawiesiny komórek HCT-116 (komórki przygotowane wcześniej przez prowadzącego).
Przeniesiono pobrane komórki do czystej probówki nr.2.
Dodano 30µl roztworu erytrozyny do probówki nr.2.
Wymieszano zawartość probówki nr.2 przez kilkukrotne, delikatne pipetowanie.
Przygotowano komorę Bürkera – nałożono szkiełko nakrywkowe.
Po obu stronach szkiełka nakrywkowego naniesiono do komory Bürkera po 10 µl zawartości probówki nr.2.
Wstawiono przygotowany preparat (komorę Bürkera) pod mikroskop świetlny oraz odpowiednio ustawiono mikroskop.
Policzono żywe (nie wybarwione) oraz martwe (wybarwione) komórki w 5 zaznaczonych kwadratach w każdej z obu części komory Bürkera.
Zapisano wyniki w dzienniku laboratoryjnym
Wynik ćwiczenia: zaobserwowano i policzono 104 żywe komórki (nie wybarwionych) oraz 40 martwych komórek (wybawionych).
| Lp. | Ilość żywych | Ilość martwych | Odsetek martwych (%) | Barwnik |
|---|---|---|---|---|
| 1 | 104 | 40 | 27% | Erytrozyna |
Wyniki innych sekcji:
| Lp. | Ilość żywych | Ilość martwych | Odsetek martwych (%) | Barwnik |
|---|---|---|---|---|
| 1 | 101 | 74 | 42% | Erytrozyna |
| 2 | 159 | 35 | 18% | Erytrozyna |
| 3 | 80 | 9 | 10% | Erytrozyna (5 kwadratów) |
| 4 | 86 | 19 | 18% | Błękit trypanowy |
| 5 | 119 | 37 | 23% | Błękit trypanowy |
| 6 | 111 | 50 | 31% | Błękit trypanowy |
| 7 | 85 | 35 | 29% | Błękit trypanowy |
| 8 | 43 | 13 | 23% | Błękit trypanowy (5 kwadratów) |
Wnioski:
Wyniki wszystkich obserwacji wskazują na zdecydowaną przewagę żywych komórek w przygotowanych preparatach.
W preparatach z erytrozyną procentowy odsetek martwych komórek względem wszystkich komórek policzonych w danym preparacie jest zazwyczaj niższy w preparatach z błękitem trypanowym.
Sugestia: Wyższy odsetek martwych komórek w preparatach z błękitem trypanowym w stosunku do wszystkich komórek policzonych w danym preparacie aniżeli ich odsetek w preparatach z erytrozyną może być spowodowany szybszym absorbowaniem błękitu przez martwe komórki lub błędnym przeprowadzeniem ćwiczenia.