Judyta Baczmaga
W-7 Ochrona Środowiska
Nr albumu 206069

MIKROBIOLOGIA - SPRAWOZDANIE Nr 6

Temat 7: Metody posiewu i hodowli drobnoustrojów (2)

1. Cel ćwiczenia

Celem ćwiczenia było zapoznanie się z metodami posiewu i hodowli drobnoustrojów na różnych podłożach.

1. Część doświadczalna

   1. Posiew na podłoże agarowe ze skrobią.

Wykonano posiew metoda powierzchniową. Za pomocą pipety, na pożywkę wprowadzono 100µl zawiesiny bakterii Bacillus sp. Rozprowadzono głaszczką. Inkubowano w temperaturze pokojowej przez 7 dni. Po inkubacji hodowlę zalano płynem Lugola i odczekano kilka minut.

1. Hodowla bakterii nitryfikacyjnych.

Do probówki z pożywką mineralną Winogradskiego dla I fazy nitryfikacji wprowadzono 0,5cm³ wody rzecznej. Tę samą czynność wykonano dla pożywki Winogradskiego dla II fazy nitryfikacji. Inkubowano przez 21 dni.

• Wykrywanie azotynów: Na szkiełko zegarkowe naniesiono pipetą 0,2cm³ hodowli. Następnie oddzielnymi pipetami dodano po 0,1cm³ kwasu sulfanilowego i odczynnika Griessa.

• Wykrywanie azotanów: Usunięto azotyny. W tym celu do probówki wsypano 1g mocznika, rozpuszczono, wstawiono do łaźni wodnej o temperaturze 10°C i wlano 2cm³ stężonego kwasu siarkowego. Po wydzieleniu się pęcherzyków gazu wlano 1cm³ roztworu dwufenyloaminy.

• Wykrywanie azotanów amonowych: Na szkiełko zegarkowe naniesiono 0,2cm³ odczynnika Nesslera. Inną pipetą dodano 0,2cm³ badanej hodowli, wymieszano.
  

  1. Hodowla bakterii chemosyntezy żelazistej.

Do probówki z pożywka mineralną wg Lieske, która zawierała Fe⁺⁺, wprowadzono 0,5 cm³ wody rzecznej oraz odrobinę opiłków żelaza. Inkubowano przez 14 dni w temperaturze pokojowej.

1. Hodowla w warunkach beztlenowych bakterii denitryfikacyjnych.

Aby stworzyć warunki beztlenowe, probówkę z bulionem z KNO₃ umieszczono w łaźni wodnej (temp. 100°C) na 5 minut. Następnie schłodzono do 30°C. Do próby dodano 0,5 cm³ wody rzecznej. Probówkę uszczelniono za pomocą folii i korka. Inkubowano przez 7 dni w temperaturze pokojowej.

1. Hodowla w warunkach beztlenowych bakterii desulfurykacyjnych.

Słupki agarowe z octanem ołowiu zaszczepiono wodą rzeczną metoda wkłutą. Inkubowano przez 7 dni w temperaturze pokojowej.

1. Hodowla w warunkach beztlenowych bakterii fermentacji masłowej.

Do probówki z 2% roztworem sacharozy dodano 0,5 cm³ wody rzecznej. W celu stworzenia warunków beztlenowych i zabicia bakterii nieprzetrwalnikujących, całość ogrzewano w łaźni wodnej przez 10 minut w temperaturze ok. 75-80°C. Schłodzono i uszczelniono. Inkubowano przez 7 dni w temperaturze pokojowej.

1. Wyniki
   

   1. Posiew na podłoże agarowe ze skrobią.
      Po zalaniu hodowli płynem Lugola wystąpiło bardzo ciemne, brązowe zabarwienie.

   2. Hodowla bakterii nitryfikacyjnych. – zdjęcia wykonane na zajęciach

• Wykrywanie azotynów – pojawienie się czerwonego zabarwienia. Dla porównania zabarwienie różowe z hodowli z ziemią ogrodową.

• Wykrywanie azotanów – w probówce pojawiło się granatowe zabarwienie.

• Wykrywanie kationów amonowych – pojawienie się zabarwienia czerwonobrunatnego. Dla porównania, zabarwienie pomarańczowe z hodowli z ziemią ogrodową.

1. Hodowla bakterii chemosyntezy żelazistej.

W badanej próbie na powierzchni hodowli znajdowały się opiłki żelaza, natomiast na dnie pojawiło się rdzawe zabarwienie.

1. Hodowla w warunkach beztlenowych bakterii denitryfikacyjnych.

W badanej próbie nie wydzielił się gaz oraz nie wytworzyły się ani azotyny ani amoniak.

1. Hodowla w warunkach beztlenowych bakterii desulfurykacyjnych.

Pożywka nie ściemniała ani wzdłuż, ani wokół linii wkłucia.

1. Hodowla w warunkach beztlenowych bakterii fermentacji masłowej.

W probówce nie pojawiły się żadne widoczne zmiany, brak zapachu zjełczałego masła.

1. Wnioski

   1. Posiew na podłoże agarowe - Próba z bakterią Bacillus sp. nie przereagowała ze skrobią, co oznacza że ten szczep bakterii nie posiada zdolności hydrolizy skrobi.

   2. Hodowla bakterii nitryfikacyjnych:

• Wykrywanie azotynów – czerwone zabarwienie wskazuje na obecność azotynów,

• Wykrywanie azotanów – granatowe zabarwienie wskazuje na obecność azotanów,

• Wykrywanie kationów amonowych – czerwonobrunatne zabarwienie wskazuje na obecność kationów amonowych.

  1. Hodowla bakterii chemosyntezy żelazistej – pojawienie się rdzawego zabarwienia świadczy o reakcji utleniania żelaza.

  2. Hodowla w warunkach beztlenowych bakterii nitryfikacyjnych – brak zmian w badanej próbie świadczy o tym, że bakterie z tej próby nie posiadają zdolności do denitryfikacji.

  3. Hodowla w warunkach beztlenowych bakterii denitryfikacyjnych – próba nie pociemniała, co oznacza że, SO₄^-2 nie zostało zredukowane do S^-2 i nie mogło przereagować z kationami Pb.

  4. Hodowla w warunkach beztlenowych bakterii fermentacji masłowej. – brak jakichkolwiek zmian świadczy o tym, że w próbie nie wytworzył się kwas masłowy.