Judyta Baczmaga
W-7 Ochrona Środowiska
Nr albumu 206069
MIKROBIOLOGIA - SPRAWOZDANIE Nr 4
Temat 4,5: Sterylizacja i dezynfekcja
Cel ćwiczenia:
Celem ćwiczenia było zapoznanie się z metodami sterylizacji i dezynfekcji.
Część doświadczalna
Mikrobiologiczna kontrola skuteczności sterylizacji parą wodną w autoklawie.
Po uprzedniej sterylizacji w autoklawie, krążki Sporali A, czyli specjalne krążki nasycone zawiesiną zarodników określonego szczepu laseczek Bacillus, przeniesiono za pomocą sterylnej pęsety do probówki z bulionem odżywczym. Inkubowano w odpowiedniej temperaturze przez 7 dni.
Mikrobiologiczna kontrola skuteczności sterylizacji w suchym gorącym powietrzu.
Po uprzedniej sterylizacji w suchym gorącym powietrzu, krążki Sporali S, przeniesiono sterylną pęsetą do probówki z bulionem odżywczym. Inkubowano w odpowiedniej temperaturze przez 7 dni.
Przeprowadzono także próbę kontrolną ze sporalami niesterylnymi.
Badanie skuteczności działania wybranych środków dezynfekcyjnych.
Denko szalki Petriego z agarem odżywczym podzielono na 5 części i opisano następująco: K – kontrola (palec nie dezynfekowany), -OH – dezynfekcja alkoholem, H2O2 – dezynfekcja wodą utlenioną, NaCl – przetarcie roztworem soli fizjologiczną, M – mycie mydłem. Uchylono wieczko szalki i przyłożono opuszek palca do powierzchni agaru w sektorze kontrolnym K. Następnie sterylną pęsetą pobrano sterylną watę, namoczona ją w alkoholu i przetarto opuszek kolejnego palca. Dalej wykonano tę samą czynność z następnymi środkami, za każdym razem inny środek na opuszek innego palca. Szalkę inkubowano w temperaturze pokojowej przez 7 dni.
Oznaczenie współczynnika fenolowego.
Wykonano rozcieńczenie fenolu i rozlano po 5 ml do sterylnych probówek. Przygotowano taką samą ilość probówek z bulionem odżywczym. Kolejno zaszczepiono rozcieńczenia fenolu o objętości 0,5 ml i wymieszano we wstrząsarce. Inkubowano przez 10 minut. Za pomocą ezy materiał z zaszczepionych rozcieńczeń przeniesiono do probówek z bulionem odżywczym. Inkubowano 48 h w temperaturze 37°C.
Badanie skuteczności działania promieniowania ultrafioletowego na drobnoustroje obecne powietrzu.
Przed włączeniem lampy UV: dwie szalki Petriego z agarem odżywczym i dwie z podłożem Sabourauda, zdjęto wieczka i położono w pobliżu wyłączonej lampy UV na 10 minut. Następnie nałożono wieczka, usunięto szalki, położono nowe szalki.
Po włączeniu lampy: Włączono lampę na ok. 30 minut. Wyłączono lampę, otworzono szalki Petriego na 10 minut. Zamknięto szalki. Inkubowano w temperaturze pokojowej przez tydzień.
Badanie skuteczności filtracji.
1 cm3 wody przeznaczonej do sterylizacji posiano do probówki z bulionem odżywczym. Filtr membranowy umieszczono na sitku za pomocą sterylnej pęsety, Podłączono filtr, przefiltrowano wodę do sterylizacji. Zdjęto sitko z filtrem i pobrano 1 cm3 filtratu i posiano do następnej próbówki z bulionem odżywczym. Inkubowano przez 7 dni w temperaturze pokojowej.
Wyniki
Mikrobiologiczna kontrola skuteczności sterylizacji parą wodną w autoklawie.
W probówce z bulionem odżywczym nie zaobserwowano żadnych zmian. Substancja pozostała klarowna.
Mikrobiologiczna kontrola skuteczności sterylizacji w suchym gorącym powietrzu.
W probówce z bulionem odżywczym pojawiło się zmętnienie próby a na powierzchni utworzył się kożuch z komórek bakterii.
W probówce z niesterylnymi sporalami pojawiło się zmętnienie próby.
Badanie skuteczności działania wybranych środków dezynfekcyjnych.
| L.p. | K | -OH | H2O2 | NaCl | M |
|---|---|---|---|---|---|
| 1. | 62 | 0 | 1 | 16 | 73 |
| 2. | 50 | 1 | 0 | 8 | 57 |
| 3. | 130 | 3 | 2 | 62 | 50 |
| 4. | 13 | 0 | 30 | 7 | 8 |
| 5. | 34 | 1 | 15 | 2 | 18 |
| 6. | 2 | 4 | 0 | 2 | 7 |
| 7. | 13 | 2 | 0 | 20 | 5 |
| 8. | 73 | 82 | 1 | 73 | 64 |
| 9. | 44 | 0 | 1 | 1 | 41 |
Oznaczenie współczynnika fenolowego.
| Domestos | Fenol 20% | Fenol 10% | Fenol 5% | |
|---|---|---|---|---|
| 20% | - | - | ||
| 10% | - | - | ||
| 5% | - | - | ||
| 4% | - | - | ||
| 2% | - | - | ||
| 1% | - | - | ||
| 0,8% | - | - | ||
| 0,4% | - | + | ||
| 0,2% | - | - | ||
| 0,16% | - | - | ||
| 0,08% | + | + | ||
| 0,04% | + | - |
WF = $\frac{\text{najwi}e\text{ksze\ rozcie}n\text{czenie\ badanego\ zwi}a\text{zku\ zabijaj}a\text{ce\ bakterie}}{\text{Najwi}e\text{ksze\ rozcie}n\text{czenie\ fenolu\ zabijaj}a\text{cego\ bakterie}}$ = $\frac{500}{250}$ = 2
500 – rozcieńczenie 0,16%
250 – rozcieńczenie 0,4%
Badanie skuteczności działania promieniowania ultrafioletowego na drobnoustroje obecne powietrzu.
| UV | przed | po |
|---|---|---|
| agar odżywczy | 3 | 1 |
| podłoże Sabourauda | 7 | 0 |
Badanie skuteczności filtracji.
Zarówno w probówce „przed filtracją” jak i „po filtracji” pojawiło bardzo widoczne zmętnienie.
Wnioski
W probówkach w których nie pojawiły się żadne zmiany, nie wystąpiło zmętnienie, nie pojawił się kożuch bądź osad na dnie sterylizacja była skuteczna.
W probówkach w których pojawiły się jakiekolwiek zmiany sterylizacja okazała się nieskuteczna.
Najskuteczniejszym dezynfekantem okazał się alkohol, ponieważ po przetarciu opuszków palców watą z alkoholem, pojawiło się najmniej kolonii grzybów, bądź całkowicie zniknęły.
Umycie dłoni mydłem nie usunęło większości drobnoustrojów z powierzchni dłoni, ponieważ wiele bakterii znajduje się w fałdach skóry i mieszkach włosowych, namnażają się głównie w gruczołach łojowych i potowych i dlatego są trudne do usunięcia.
Działanie promieniowania ultrafioletowego na drobnoustroje obecne w powietrzu okazało się skuteczne. Ilość kolonii po włączeniu lampy UV uległa zmniejszeniu w porównaniu z ilością kolonii przed włączeniem lampy, w przypadku agaru odżywczego oraz całkowitemu zaniknięciu w przypadku podłoża Sabourauda.
Filtracja okazała się nie skuteczna. Mogło to być spowodowane, np. niedokładnym wysterylizowaniu pęsety czy też złym pobraniu filtratu.