Poszukiwanie transformatów polega na :
- wyizolowaniu badanej populacji / bakterii ,
- powielenia genów rRNA mikroorganizów przy pomocy PCR ,
- klonowania w wektorze uzyskanych genów rRNA (następuje transformacja bakterii ) ,
- otrzymania sekwencji DNA ,
- porównania sekwencji genów rRNA w bazach danych .
5. Enzymy używane w klonowaniu .
enzymy restrykcyjne to wyizolowane z bakterii enzymy, które rozpoznają specyficzne sekwencje na nici DNA (zazwyczaj są to sekwencje palindromowe), a następnie przecinają dwuniciową cząsteczkę DNA w ściśle określonym miejscu. Dzieki takim cięciom uzyskujemy lepkie końce lub tępe końce .
ligazy DNA - enzymy katalizujące tworzenie wiązań fosfodiestrowych pomiędzy hydroksylowym końcem 3` a końcem 5' zawierającym resztę fosforową w DNA. Umożliwiają w ten sposób wypełnianie przerw powstałych na jednej nici dwuniciowego DNA oraz łączenie fragmentów DNA posiadających homologiczne lepkie lub tępe końce.
RNazy - to enzymy z klasy nukleaz dzielące cząsteczki RNA na krótsze łańcuchy lub pojedyncze nukleotydy przez hydrolizę wiązań fosfodiestrowych.
DNaza – enzymy hydrolityczne (hydrolazy) katalizujące rozpad łańcucha DNA, na krótsze łańcuchy lub pojedyncze nukleotydy. Należą do nukleaz.
polimeraza - enzym mający zdolność syntezy nici komplementarnej na matrycy pojedynczej nici kwasu nukleinowego. W zależności od syntetyzowanej nici wyróżnia się polimerazy DNA syntetyzujące nić DNA (np. w procesie replikacji DNA) i polimerazy RNA syntetyzujące nić RNA (np. w procesie transkrypcji). Przykładem może być polimeraza Taq (polimeraza DNA zależna od DNA pochodząca z bakterii Thermus aquaticus) jest używana w reakcji PCR .