Grupa 32 Zespół 3.	Ćwiczenie nr 4	Data wykonania 31.03.2009	Ocena
	Temat ćwiczenia: Przygotowanie próbek do analizy chromatograficznej.

1. Wstęp teoretyczny.

Większość metod analitycznych wymaga wstępnego przygotowania próbki do analizy. Przygotowywanie to ma na celu osiągnięcie określonych parametrów próbki, które są wymagane dla danej metody analitycznej.

Mogą to być:

• wilekość (masa),

• stan skupienia,

• zakres stężeń analitów,

• obecność interferentów.

W ćwiczeniu zastosowano metodę ekstrakcji do fazy stałej SPE. Umożliwia ona zatężenie analitu. Metoda oparta jest na zjawisku sorpcji związku organicznego na rozbudowanej powierzchni odpowiedniego sorbenta pokrytego warstwą fazy stacjonarnej i następnie na selektywnym wymywaniu organicznymi rozpuszczalnikami. W taki sposób można uzyskać wielokrotne zatężenie analizowanych substancji. Absorberami SPE mogą być żele krzemionkowe, zeolity, polimery styrenowo-diwinylobenzenowe, węgle aktywne, sadze i wiele innych. Wymywanie substancji zaadsorbowanych w złożu przeprowadza się najczęściej rozpuszczalnikami organicznymi. SPE stosuje się do analizy związków organicznych w próbkach wody, ścieków, płynów ustrojowych i fizjologicznych.

Wielopierścieniowe węglowodory aromatyczne (WWA) - policykliczne węglowodory zawierające skondensowane pierścienie aromatyczne bez podstawników. Wiele z nich podejrzewanych jest lub ma udowodnione własności kancerogenne, są to związki toksyczne (toksyczność przewlekła). Badana próbka wody jest zanieczyszczona dwoma z nich:

Według norm Unii Europejskiej dopuszczalne stężenie WWA w wodzie wynosi 0,2 mg/dm³.

1. Cel ćwiczenia

Celem ćwiczenia było wyznaczenie stężenia fluorenu i fluorantenu w próbce wody połączonymi technikami SPE i HPLC.

1. Aparatura:

• kolumna RP-18 do SPE z wypełnieniem ODS;

• zestaw z pompą próżniową,

• szkło laboratoryjne, rozpuszczalniki,

• chromatograf cieczowy z detektorem UV-Vis

1. Sposób wykonania ćwiczenia:

• uruchomienie pompy próżniowej i otwarcie kranu kolumny

• przemycie kolumny 5x1ml acetonitrylu, zbierając odciek do naczynia

• przemycie kolumny 3x1 ml izopropanolu

• przemycie kolumny 3x1 ml 10% roztworu izopropanolu w wodzie

• przemycie kolumny 2ml wody redestylowanej

• przelanie zlewek rozpuszczalników do butelki

• przepuszczenie przez kolumnę 100 cm3 badanej próbki (wody zdejonizowanej)

• wylanie odcieku z próbki i przygotowanie czystego naczyńka jako odbieralnik

• wymycie analitu 2x1ml acetonitrylu

• powtórzenie wyżej wymienionych czynności dla badanej próbki wody

Powyższe operacje pozwoliły zatężyć próbkę z objętości 100 ml do 2 ml.

• analiza „ślepej próbki” i próbki wody metoda HPLC

1. Obliczenia

Wyniki uzyskane z wzorcowych roztworów fluoranu i fluorantenu:

Nazwa substancji	Stężenie [μg/ml]	Czas retencji [min]	Powierzchnia piku [μV 1/100 min]
Fluoren	50	2,838	11074957
Fluoranten	50	4,397	7841081

Wyniki pomiaru badanej próbki:

Nazwa substancji	Czas retencji [min]	Powierzchnia piku [μV 1/100 min]
Fluoren	2,888	6389624
Fluoranten	4,427	2335345

Stężenie poszczególnych substancji obliczamy z zależności:

S - powierzchnia piku V_Z- objętość zatężonego analitu (2 ml) V_P - objętość próbki pierwotnej (100 ml)

Obliczenia stężenia w badanej wodzie dla fluorenu:

[µg/ml] = 0,5769 [mg/l]

Obliczenia stężenia w wycieku z kolumny dla fluorentenu

[µg/ml] = 0,2978 [mg/l]

Przeliczanie na ppm:

Gęstość wody = 998,2 [g/l]

M_fluoren=166,2 [g/mol]

M_fluorantenu=202 [g/mol]

Ilość analitu jest bardzo mała więc zaniedbujemy jego objętość

[ppm]

Nazwa substancji	Stężenie [mg/l]	ppm
Fluoren	0,5769	0,0626
Fluoranten	0,2978	0,0266

1. Wnioski

Pobieranie próbek oraz ich przygotowanie jest bardzo ważnym etapem analizy i w dużym stopniu decyduje o poprawności jej wyniku. W wyniku przeprowadzonego doświadczenia otrzymaliśmy trzy chromatogramy: wzorców (fluoren i fluoranten), ślepej próby, próbki badanej. Na podstawie porównania powierzchni pod pikami i czasów retencji odpowiadającym wzorcom i badanej próbce obliczono stężenie dwóch substancji WWA. Mimo tego, że było bardzo małe udało się je zbadać dzięki zastosowaniu ekstrakcji do fazy stałej SPE. Stężenie tych dwóch substancji blisko dwukrotnie przekracza dopuszczalne stężenie WWA w wodzie.