Szybkość reakcji jest prawie zawsze
proporcjonalna do enzymu.
Jeśli więc stęż.enz. zostanie podwojone,
Vmax przy niezmienionym stęż.
substratu wzrośnie dwukrotnie.
Wprowadzono pojęcie Bezwzględnej
Standardowej Międzynarodowej
Jednostki Aktywności Enzymów [U].
Jest to taka ilość enzymu, która
katalizuje przemianę
1 ymola substratu w ciągu
1 min, 30oC i optym.warunkach.
Mol / (L*s) = Kat / L
1 ymol – 1 min – 30oC – 1000ml
Vo = Vx S / Km+S
Inwertaza – b-Dfruktozydaza (EC 3.2.1.26).
Należy do kl.hydrolaz rozszczepiających
wiązanie b-glikozydowe w zw.
O-glikozydowych = hydroliza końcowych
nieredukujących reszt
b-D-fruktofuranozydowych.
(SacharD-glu+D-fruk).
Rozpowszechniona u roślin, choć
najlepsze preparaty z drożdży
piwnych/piekarskich ^stęż.
Jest to enzym wew-kom.
Zasada oznacz.aktyw.INW.opiera się
na pomiarze C cukrów reduk.,
których ilość ^ w miarę działania enzymu.
(R-r z monosacharydami gotujemy
z odcz.Somoygi + Nelsona L=520)
1. Autoliza – kilka h w 0,1M NaHCO3, 40C,
2. Rozbicie kom przez homogenizator ostrzowy
3. Ucieranie droż.z piaskiem w obecności eteru
i extrakcja białek wodą.
0,02 – 0,23
1 – X (Akt.rr enz =… J/ml)
… -- 10 mg
X – 1 mg (Akt specyf. … /mg B.)
WSPÓŁCZ.OCZYSZCZ.ENZ.
J.Bodańskiego – równoważna
jest 1 mg fosforu (31g/mol)
wyzwolonemu przez fosfatazę
w 100 ml surowicy z b-gliceroFosforanu
w 60 min inkubacji w 37oC.
[Wartości prawidłowe w surowicy]
- w J.B. [1,5 -4]
- w J.standard. [8 -21,5]
J.King-Armstronga (1mg fenolu(94)
100 ml s.z.FenyloFosforanu w 15min)
[3,5- 13] [25- 92]
J.KLEINA (1mg fenoloftal.(318) enzym, 30 min.)
[0,6 -4] [0,6 -4,2]
J.Bessey’a równoważna jest
1 ymol ParaNitroFenolu uwolnionemu przez
enz.w 1000 ml surowicy w 1h inkubacji w 37C
z ParaNitroFenyloFosforanem.
1000/60=16,67 ymol
[0,8 -2,3] [13,5 -38]