laboratorium 14, II rok, II rok CM UMK, Giełdy, 2 rok, II rok, biochemia


Laboratorium 14 F I Z Y C Z N E I C H E M I C Z N E W Ł A Ś C I W O Ś C I

K W A S Ó W N U K L E I N O W Y C H

Ćwiczenie 1. Rozpuszczalność kwasów nukleinowych.

Do 1 mL roztworu DNA dodaj kroplę stężonego roztworu HCl. Zaobserwuj zmętnienie wynikające z wytrącenia kwasu nukleinowego. Następnie dodaj do próby kilka kropel roztworu amoniaku - kwas ulega ponownemu rozpuszczeniu. Sformułuj wnioski.

Ćwiczenie 2. Reakcje odróżniające RNA od DNA.

  1. wykrywanie RNA - próba Biala

Do jednej probówki dodaj 1 mL roztworu RNA, a do drugiej - 1 mL roztworu DNA. Następnie do obu probówek dodaj po 1 mL roztworu FeCl3 i 0,4 mL roztworu orcyny. Probówki umieść we wrzącej łaźni wodnej na 20 minut. Zaobserwuj różnicę w powstającej barwie między probówkami (w obecności rybozy powstaje zielone zabarwienie o natężeniu około 10 razy większym niż w obecności deoksyrybozy). Sformułuj wnioski.

  1. wykrywanie DNA - próba Dischego

Do jednej probówki dodaj 1 mL roztworu RNA, a do drugiej - 1 mL roztworu DNA. Następnie do obu probówek dodaj po 2 mL roztworu difenyloaminy. Probówki umieść we wrzącej łaźni wodnej na 15 minut. Zaobserwuj różnicę w powstającej barwie między probówkami (w obecności deoksyrybozy powstaje niebieskie zabarwienie). Sformułuj wnioski.

  1. wykrywanie DNA - reakcja Feulgena

Do jednej probówki dodaj 1 mL roztworu RNA, a do drugiej - 1 mL roztworu DNA. Następnie do obu probówek dodaj po 4 krople 2 M roztworu HCl. Probówki umieść we wrzącej łaźni wodnej na 5 minut. Następnie ostudź zawartość probówek pod bieżącą wodą. Do obu probówek dodaj po 1 mL 1 M roztworu NaOH i po 2 mL odczynnika Schiffa. Odczekaj około 10 minut. Zaobserwuj różnicę w powstającej barwie między probówkami (w obecności deoksyrybozy powstaje czerwono-fioletowe zabarwienie). Sformułuj wnioski.

Ćwiczenie 3. Jakościowa analiza DNA.

  1. kwaśna hydroliza DNA

Do probówki dodaj 3 mL roztworu DNA oraz 3 mL 72% roztworu HClO4. Probówkę ogrzewaj we wrzącej łaźni wodnej przez 45 minut. Uzyskany hydrolizat po ostudzeniu służy do jakościowej analizy DNA.

  1. wykrywanie pentozy w hydrolizacie DNA

Do 1 mL hydrolizatu DNA dodaj 2 mL stężonego roztworu HCl oraz 2 krople roztworu floroglucyny. Probówkę ogrzewaj we wrzącej łaźni wodnej przez 1 minutę. Zaobserwuj powstającą barwę i sformułuj wniosek.

  1. wykrywanie kwasu fosforowego w hydrolizacie DNA

Zobojętnij 0,5 mL hydrolizatu DNA przy użyciu 1,5 mL roztworu amoniaku. Następnie dodaj 1 mL stężonego roztworu HNO3 i 2 mL 5% roztworu molibdenianu amonu. Zawartość probówki ogrzewaj we wrzącej łaźni wodnej przez 5 minut. Zaobserwuj powstający osad i sformułuj wniosek.

  1. wykrywanie puryn

Do jednej probówki dodaj 1 mL hydrolizatu DNA, a do drugiej 1 mL roztworu adeniny. Następnie do obu probówek dodaj po 2-3 krople stężonego roztworu amoniaku. Wymieszaj i do obu probówek dodaj po 4-5 kropli amoniakalnego roztworu wodorotlenku srebra. Zaobserwuj tworzenie się zmętnienia/osadu. Sformułuj wniosek.

Ćwiczenie 4. Jakościowa analiza RNA.

  1. kwaśna hydroliza RNA

Do probówki dodaj 3 mL roztworu RNA oraz 3 mL 72% roztworu HClO4. Probówkę ogrzewaj we wrzącej łaźni wodnej przez 45 minut. Uzyskany hydrolizat po ostudzeniu służy do jakościowej analizy RNA.

  1. wykrywanie pentozy w hydrolizacie RNA

Do 1 mL hydrolizatu RNA dodaj 2 mL stężonego roztworu HCl oraz 2 krople roztworu floroglucyny. Probówkę ogrzewaj we wrzącej łaźni wodnej przez 1 minutę. Zaobserwuj powstającą barwę i sformułuj wniosek.

  1. wykrywanie kwasu fosforowego w hydrolizacie RNA

Zobojętnij 0,5 mL hydrolizatu RNA przy użyciu roztworu amoniaku (ok. 1,5 mL). Następnie dodaj 1 mL stężonego roztworu HNO3 i 2 mL 5% roztworu molibdenianu amonu. Zawartość probówki ogrzewaj we wrzącej łaźni wodnej przez 5 minut. Zaobserwuj powstający osad i sformułuj wniosek.

  1. wykrywanie puryn w hydrolizacie RNA

Do jednej probówki dodaj 1 mL hydrolizatu RNA, a do drugiej 1 mL roztworu adeniny. Następnie do obu probówek dodaj po 2-3 krople stężonego roztworu amoniaku. Wymieszaj i do obu probówek dodaj po 4-5 kropli amoniakalnego roztworu wodorotlenku srebra. Zaobserwuj tworzenie się zmętnienia/osadu. Sformułuj wniosek.

Ćwiczenie 4. Widmo absorpcyjne kwasów nukleinowych.

Zasada:

Wszystkie związki zawierające układ purynowy lub pirymidynowy pochłaniają światło nadfioletowe w zakresie fal o długości 250 - 280 nm. Wynika to z obecności wiązań podwójnych i heteroatomów w pierścieniu purynowym i pirymidynowym. Dlatego dla kwasów nukleinowych oraz budujących je nukleotydów i zasad azotowych charakterystyczne są widma absorpcyjne o maksimach absorpcji w zakresie 250 - 280 nm. Ponieważ reszty cukrowa i fosforanowa nie mają większego wpływu na pochłanianie światła w tym zakresie fal, widma absorpcji nukleotydów, nukleozydów i zasad azotowych są podobne.

Wykonanie:

Dokonaj pomiaru widma absorpcji dla następujacych roztworów: adeniny, adenozyny, hipoksantyny, inozyny, ksantyny i guaniny. Pomiary należy przeprowadzić na spektrofotometrze z ciągłą rejestracją widma względem próby ślepej (H2O) w kuwetach 1-cm w zakresie fal 200 - 350 nm. Zaobserwuj przebieg widm absorpcji dla badanych roztworów. Odczytaj i zanotuj maksima i minima absorpcji dla badanych związków w badanym zakresie fal.



Wyszukiwarka

Podobne podstrony:
Laboratorium 18, II rok, II rok CM UMK, Giełdy, od Joe, biochemia
Laboratorium 4 CHROMATOGRAFIAI, II rok, II rok CM UMK, Giełdy, 2 rok, II rok, biochemia
Laboratorium 2 BIALKA, II rok, II rok CM UMK, Giełdy, 2 rok, biochemia, koło 1
Laboratorium 19, II rok, II rok CM UMK, Giełdy, od Joe, biochemia, BIOCHEMIA, GIEŁDY - KOLOKWIA, Gie
Laboratorium 16, II rok, II rok CM UMK, Giełdy, 2 rok, II rok, biochemia
Laboratorium 11 OKSYDOREDUKTAZY, II rok, II rok CM UMK, Giełdy, od Joe, biochemia
pokarmowka gielda, II rok, II rok CM UMK, Giełdy, od Joe, FIZJOLOGIA, KOLOKWIA, NEUROFIZJOLOGIA, gie
egzamin 2007, II rok, II rok CM UMK, Giełdy, 2 rok, II rok, giełdy od Nura, fizjo, egzamin, New fold
żołądek ść 4, II rok, II rok CM UMK, Giełdy, 2 rok, histologia
MELATONINA, II rok, II rok CM UMK, Giełdy, od Joe, biochemia, BIOCHEMIA, GIEŁDY - EGZAMIN, Dodatkowe
lekarski ii rok ii sem, II rok, II rok CM UMK, Giełdy, 2 rok, inne
Fizjologia kolo RKZ, II rok, II rok CM UMK, Giełdy, od Joe, FIZJOLOGIA, KOLOKWIA, RÓWNOWAGA KWASOWO-
neuron, II rok, II rok CM UMK, Giełdy, 2 rok od Pawła, fizjologia, Opracowanie ćwiczenia
Regulacja przyjmowania pokarmu, II rok, II rok CM UMK, Giełdy, 2 rok, fizjo
Neurofizjologia, II rok, II rok CM UMK, Giełdy, od Joe, FIZJOLOGIA, KOLOKWIA, NEUROFIZJOLOGIA
2007 ---, II rok, II rok CM UMK, Giełdy, 2 rok od Pawła, fizjologia, egzamin, wordy
nerka, II rok, II rok CM UMK, Giełdy, 2 rok, II rok, fizjologia

więcej podobnych podstron