Laboratorium 16 N I E E N Z Y M A T Y C Z N E S K Ł A D N I K I K R W I
Ćwiczenie 1. Reakcja benzydynowa.
Do jednej kropli krwi rozcieńczonej 1 : 10 dodaj 1 mL wody, 1 kroplę roztworu benzydyny oraz 1 kroplę 3% roztworu H2O2. Zaobserwuj zmianę zabarwienia i sformułuj wniosek.
Ćwiczenie 2. Otrzymywanie kwaśnej i zasadowej hematyny.
Do dwóch probówek wlej po 1 mL krwi rozcieńczonej 1 : 10. Następnie do jednej probówki dodaj 1 kroplę 2 M roztworu NaOH, a do drugiej - 1 kroplę 2 M roztworu HCl. Zaobserwuj zmiany w zabarwieniu w obu probówkach i sformułuj wnioski.
Ćwiczenie 3. Wykrywanie żelaza w hemoglobinie.
Do 3 kropli krwi rozcieńczonej 1 : 10 dodaj 0,5 mL 60% roztworu HClO4 (uwaga: jest to środek żrący!) oraz 0,5 mL 30% roztworu H2O2 (perhydrol). Ogrzewaj probówkę przez około 15 minut we wrzącej łaźni wodnej - do uzyskania całkowitego odbarwienia roztworu. Po ostudzeniu probówki pod bieżącą wodą, dodaj kilka kropli K4[Fe(CN)6]. Zanotuj zmianę barwy i sformułuj wniosek (nazwij powstały kompleks!).
Ćwiczenie 4. Ilościowe oznaczanie Hb metodą cyjano-methemoglobinową.
Do probówki zawierającej 2,5 mL odczynnika Drabkina (uwaga: jest to środek trujący!) dodaj 10 μL krwi. Wymieszaj próbę i odstaw na 20 minut. Po tym czasie zmierz absorbancję próby przy długości fali λ = 540 nm, używając odczynnika Drabkina jako próby ślepej. Następnie wlej do kuwetki 1,5 mL wzorcowego roztworu methemoglobiny i zmierz absorbancję próby wzorcowej przy tej samej długości fali. Następnie oblicz stężenie hemoglobiny według wzoru:
stężenie Hb [g/100 mL] = (Apróba badana/Apróba wzorcowa) × Kwzorzec
Ćwiczenie 5. Wykrywanie składników nieorganicznych w surowicy krwi.
odbiałczanie surowicy za pomocą TCA
Do probówki odmierz 2 mL surowicy oraz 4 mL wody, wymieszaj i dodaj 1,5 mL 20% roztworu TCA. Odstaw probówkę na 15 minut, a następnie przesącz przez bibułę filtracyjną. Uzyskany preparat odbiałczonej surowicy wykorzystaj do wykonania doświadczeń b - d.
wykrywanie jonów Ca2+
Do 0,5 mL odbiałczonej surowicy dodaj 0,5 mL roztworu szczawianu amonowego. Pocieraj ścianki probówki bagietką w celu zainicjowania krystalizacji. Wynik zinterpretuj zapisując odpowiednie równanie reakcji.
wykrywanie jonów Cl-
Do 0,5 mL odbiałczonej surowicy dodaj 5 kropel stężonego roztworu HNO3 oraz kilka kropli 0,1 M roztworu AgNO3 aż do wytrącenia osadu. Wynik zinterpretuj zapisując odpowiednie równanie reakcji.
wykrywanie jonow PO43-
Do 0,5 mL odbiałczonej surowicy dodaj 0,5 mL 2,5% roztworu molibdenianu amonu i ogrzewaj przez 5 minut we wrzącej łaźni wodnej. Wynik zinterpretuj zapisując odpowiednie równanie reakcji.
Ćwiczenie 6. Wykrywanie lipidów w surowicy krwi.
Do 0,5 mL surowicy dodaj 4,5 mL 1% roztworu fenolu w roztworze NaCl. Wytrząśnij i pozostaw na 30 minut. Zaobserwuj zmętnienie.
Ćwiczenie 7. Wykrywanie bilirubiny w surowicy krwi.
Do 3 probówek napipetuj po 1 mL surowicy. Do 1 probówki dodaj 0,5 mL etanolu i 0,5 mL odczynnika dwuazowego (odczyn pośredni), do 2 probówki - 0,5 mL odczynnika dwuazowego (odczyn bezpośredni), a do 3 probówki - 0,5 mL wody destylowanej (próba kontrolna). Odstaw probówki na 30 minut. Zaobserwuj zmiany barwy w probówkach i sformułuj wnioski.
Ćwiczenie 8. Oznaczanie stężenia kwasu moczowego w surowicy krwi metodą enzymatyczną.
Wykonaj zgodnie z załączoną instrukcją.