ZAJĘCIA LABORATORYJNE

MONITORNING SKAŻEŃ

METODY OCENY CZYSTOŚCI MIKROBIOLOGICZNEJ

BADANEJ POWIERZCHNI

Środa 13.15 - 15.00

1. Aleksandra Kosiorek

2. Anna Pietrzak

3. Marta Wujek

4. Przemysław Woiński

WYKONANIE ĆWICZENIA

	Badanie czystości powierzchni płaskich - metoda tradycyjna tamponowa z użyciem szablonu.
Użyte odczynniki	metalowy szablon o wymiarach 5x5 pęseta tampon 20 ml soli fizjologicznej
Przebieg doświadczenia	Tamponem zwilżonym w soli fizjologicznej zmyliśmy 10-krotnie powierzchnię płytek nad zlewem ograniczoną metalowym szablonem. Następnie tampon umieściliśmy w butelce z 20 ml soli fizjologicznej i wytrząsaliśmy. Po dokładnym wytrząsaniu wykonaliśmy posiewy według następujących schematów:

	Ogólna liczba bakterii
Użyte odczynniki	2 ml popłuczyn bulion z nystatyną
Przebieg doświadczenia	Z butelki pobraliśmy po 1 ml popłuczyn i przenieśliśmy na 2 płytki, a następnie zalaliśmy bulionem z nystatyną. Inkubowaliśmy w 30 ^oC.
Liczba wyhodowanych kolonii	płytka nr 1 - 17 płytka nr 2 - 30 średnia z płytek - 23,5
Obliczenia	23,5 * 20ml - 25 cm^2 x - 100 cm^2 x=1880=18,8*10^2jtk/100cm^2

	Rozcieńczenie - ogólna liczba bakterii
Użyte odczynniki	1ml popłuczyn 9 ml soli fizjologicznej bulion z nystatyną
Przebieg doświadczenia	Aby uzyskać rozcieńczenia 10^-1 z butelki pobraliśmy 1 ml popłuczyn i przenieśliśmy do probówki zawierającej 9 ml soli fizjologicznej. Następnie wysialiśmy po 1 ml na 2 płytki, po czym zalaliśmy bulionem z nystatyną.
Liczba wyhodowanych kolonii	Liczba kolonii z rozcieńczenia - 18 po przeliczeniu rozcieńczenia 10^-1l.k.=180
Obliczenia	180 * 20ml - 25 cm^2 x - 100 cm^2 x=14400=14,4*10^3jtk/100cm^2

	Ogólna liczba grzybów
Użyte odczynniki	2 ml popłuczyn brzeczka z chloramfenikolem
Przebieg doświadczenia	Z butelki pobraliśmy po 1 ml popłuczyn i przenieśliśmy na 2 płytki, a następnie zalaliśmy brzeczką z chloramfenikolem. Inkubowaliśmy w 28^oC.
Liczba wyhodowanych kolonii	płytka nr 1 - 0 (próba odrzucona) płytka nr 2 - 3 średnia - 3
Obliczenia	3 * 20ml - 25 cm^2 x - 100 cm^2 x=240=2,4*10^2jtk/100cm^2

	Rozcieńczenie - ogólna liczba grzybów
Użyte odczynniki	1ml popłuczyn 9 ml soli fizjologicznej brzeczka z chloramfenikolem
Przebieg doświadczenia	Aby uzyskać rozcieńczenia 10^-^1 z butelki pobraliśmy 1 ml popłuczyn i przenieśliśmy do probówki zawierającej 9 ml soli fizjologicznej. Następnie wysialiśmy po 1 ml na 2 płytki, po czym zalaliśmy brzeczką z chloramfenikolem.
Liczba wyhodowanych kolonii	Liczba kolonii z rozcieńczenia <1 po przeliczeniu rozcieńczenia 10^-1l.k.<10
Obliczenia	10 * 20ml - 25 cm^2 x - 100 cm^2 x=800=8,0*10^2jtk/100cm^2

	Bakterie z grupy coli
Użyte odczynniki	2 ml popłuczyn 2 probówki z pożywką z siarczanem sodowo-laurylowym.
Przebieg doświadczenia	Z butelki pobraliśmy po 1 ml popłuczyn i przenieśliśmy do 2 probówek z pożywką z siarczanem sodowo-laurylowym.
Liczba wyhodowanych kolonii	Liczba kolonii <1
Obliczenia	1 * 20ml - 25 cm^2 x - 100 cm^2 x=80=8,0*10^1jtk/100cm^2

	Ogólna liczba enterokoków
Użyte odczynniki	2 ml popłuczyn 2 probówki z podłożem z azydkiem sodu i fioletem krystalicznym.
Przebieg doświadczenia	Z butelki pobraliśmy po 1 ml popłuczyn i przenieśliśmy do 2 probówek z podłożem z azydkiem sodu i fioletem krystalicznym.
Liczba wyhodowanych kolonii	Liczba kolonii <1
Obliczenia	1 * 20ml - 25 cm^2 x - 100 cm^2 x=80=8,0*10^1jtk/100cm^2

	Test odciskowy przy użyciu łopatki
Użyte odczynniki	łopatka
Przebieg doświadczenia	Otrzymaną łopatkę wyjęliśmy z opakowania tuż przed użyciem. Przyłożyliśmy ją w pobliżu miejsca pobrania próby metodą tamponową. Następnie włożyliśmy łopatkę do jałowego opakowania i poddaliśmy inkubacji.
Liczba wyhodowanych kolonii	Liczba kolonii pleśni - 5 Liczba kolonii drożdży - 2
Obliczenia dla pleśni	5 - 10,6 cm^2 x - 100 cm^2 x=47=4,7*10^1jtk/100cm^2
Obliczenia dla drożdży	2 - 10,6 cm^2 x - 100 cm^2 x=19=1,9*10^1jtk/100cm^2

	Płytka odciskowa
Użyte odczynniki	płytka odciskowa
Przebieg doświadczenia	Płytkę odciskową przyłożyliśmy w pobliżu miejsca pobrania próby metodą tamponową, przytrzymaliśmy ją dociśniętą do badanej powierzchni przez ok. 10 sekund, następnie zakryliśmy ją i poddaliśmy inkubacji.
Liczba wyhodowanych kolonii	Liczba kolonii bakterii - 6
Obliczenia	6 - 28 cm^2 x - 100 cm^2 x=21=2,1*10^1jtk/100cm^2

Wnioski

Badana przez nas powierzchnią była płytka ceramiczna znajdująca się w laboratorium mikrobiologicznym w pobliżu umywalki. Warunki panujące w sali nie są sprzyjające do rozwoju mikroorganizmów. Częsta dezynfekcja badanej przez nas powierzchni mogło mieć znaczny wpływ na uzyskane przez nas wyniki prowadzonych hodowli. Na badanej przez nas powierzchni panowały warunki bardziej sprzyjające dla rozwoju bakterii niż grzybów (o czym stanowią powyższe obserwacje i obliczenia). Metody odciskowe - zarówno łopatki, jak i płytkiodciskowe - są metodami bardziej nowoczesnymi, co pozwala na szybsze pobranie materiału z powierzchni do zbadania ogólnej liczby bakterii (w przypadku płytek) oraz grzybów (w przypadku łopatek).

---