METODY UNIERUCHAMIANIA ENZYMÓW

Zagadnienia kolokwialne:

1. Metody unieruchamiania enzymów, Wady i zalety unieruchamiania enzymów

2. Stosowane nośniki, Zakwalifikować metodę unieruchamiania, którą zastosujemy dziś na ćw. i opisać krótko

3. Charakterystyka biokatalizatorów unieruchomionych

4. Zastosowanie preparatów enzymatycznych w przemyśle spożywczym

Cel: unieruchomienie laktazy w żelu alginianu wapnia i przeprowadzenie hydrolizy laktozy oraz oznaczenie stężenia glukozy w badanych próbkach (stopnia aktywności enzymu).

Przeprowadzamy hydrolizę laktozy (do glukozy i galaktozy) przy pomocy enzymu unieruchomionego i aktywnego. Badamy zdolność hydrolityczną laktazy.

Wykonanie:

Do 20 ml rozpuszczonego alginianu należy dodać 10 ml roztworu enzymu (o stężeniu 50 mg/ml) (1 podgrupa) oraz 5 ml roztworu enzymu (o stężeniu 25 mg/ml i 5 ml wody) (2 podgrupa), dokładnie wymieszać. Następnie do zlewki (100-150 ml) wlewamy 100 ml 5% chlorku wapnia i powoli wkraplamy za pomocą strzykawki i igły 20 ml mieszaniny cały czas mieszając powoli!! na mieszadle magnetycznym (powstaną kuleczki, które nie mogą się zlepiać). Nie wolno dopuścić, aby końcówka strzykawki zetknęła się z roztworem CaCl2. Po wkropleniu całości należy dokładnie umyć strzykawkę z pozostałości alginianu. Preparat utwardzać przez 15 min. w temperaturze pokojowej, a następnie przesączyć przez lejek Buchnera (bez filtra) i przemyć 200 ml wody destylowanej.

Otrzymywanie mleka bezlaktozowego:

Preparat unieruchomionego enzymu (kuleczki) przenieść do kolby Erlenmayera 100 ml, dodać 40 ml 4,5 % roztworu laktozy i mieszać przez 15 min na mieszadle magnetycznym w temperaturze pokojowej. Oddzielić roztwór laktozy od preparatu enzymu-laktazy na sitku i w roztworze oznaczyć stężenie glukozy (w glukometrze).

Jednocześnie przygotowujemy próbę z wolnym enzymem:

- 1 podgrupa (ta która dodawała 10 ml enzymu) pobiera 6,6 ml laktazy + 40 ml 4,5% laktozy

- 2 podgrupa (ta która dodawała 5 ml enzymu) pobiera 3,3 ml laktazy i 3,3 ml wody + 40 ml 4,5% laktozy

Mieszamy przez 15 min na mieszadle magnetycznym w temperaturze pokojowej. Oznaczyć w roztworze stężenie glukozy.

Pomiary:

• 1 próba zerowa wspólna - 4,5% roztwór laktozy,

• 2 próby z unieruchomionym enzymem - (10 ml lub 5 ml laktazy)

• 2 próby z wolnym enzymem - (6,6 ml lub 3,3 ml laktazy)

Wyniki należy przedstawić w tabeli:

próba zerowa laktozy przed hydrolizą	laktoza po hydrolizie aktywnym enzymem - 6,6 ml	laktoza po hydrolizie aktywnym enzymem - 3,3 ml	laktoza po hydrolizie unieruchomionym enzymem - 10 ml	laktoza po hydrolizie unieruchomionym enzymem - 5 ml
stężenie glukozy mg/dl (aktywność enzymu)

Podstawy biotechnologii

Ćwiczenie 4

1

---