Mikroby wykład 24.10.11

Typ:Proteobacteria

Klasa:Gammaproteobacteria

rząd:Pasteurelllates

rodzina:Pasteurellaceae

Rodzaj: Pasteurella

Mannheimia

Haemophilus

Actinobacillus

P.multocida - tu jest podział bardzo istotny bo pałeczki te wytwarzają otoczki. Różnice w otoczkach spowodowały podział na grupy: A, B,C,D,E,F. W obrębie tych grup wyróżnia się typy somatyczne- dają serotypy

Serotyp= typ otoczkowy+ typ somatyczny np. B:6

Typ A

Może wystepować jako chorobotwórcza na gornych drogach oddechowych , wywołuje chorobę transportowa ( czynnik wysoce stresujący, głównie przeżuwacze) , zapalenie płuc mastitis, cholera drobiu

Typ B (a zwłaszcza B:6)

Posocznia krwotoczka u bydła w Azji

Typ C - bezotoczkowy , malopatogenny

Typ D

Razem z Bordetella bron chiseptica atakuje zatoki nosoweu świń

Typ E (e:6)

Posocznica krwotoczna u bydła w Afryce

Typ F

Atakuje drób, głównie indyki, nieżyty dróg oddechowych i zapalenie płus

P. mailtocida może mieć 3 podgatunki

• subsp multacida - głównie ludzi I ptaki

• subsp septica - ludzi I inne zwierzęta

• subsp gallicida - ludzi I sporadycznie zwierzęta

te pasterella atakuja głównie psowate i kotowate, a czasem ludzi

P.canis

P.dagmatis

P.stomatis

Koński - P.caballi

Morfologia

Pałęczki pasterella są kształtu pałeczkowatego, ale są bardzo małe (cocopałęczki), do 1,5 mikrometra. Posiadają otoczkę, nie mają rzesek, ale mogą wytwarzać fimbrie ( A,B D). Barwią się bipolarnie!!!!. Posiadają ziarnistosci na biegunach . brak przetrwalników, nie sa kwasooporne, tlenowe lub wzglednie beztlenowe

Włąsciwości hodowlane

Na agarze rosnął, dodatek krwi , surowicy,białka kurzego, w pierwszym pasażu dobrze dodać CO2. 24h 37 stop kolonie do 2 mm , wypukłe , równy brzeg, poczatkowo transparentne pozniej bardziej szare. Szczepy otoczkowe - kol. mukoidalne, wieksze i śluzowate. Charakterystyczny mysi zapach kolonii. Na agarze z krwia nie dają hemolizy.

Włąsciwości biochemiczne

Katalazo i oksydazododatnie, wytwarzają duże ilości indolu, z wyjątkiem szczepu izolowanego z drobia, wytwarzaja H2S, nie wytwa ureazy, bezgazowo glukoze, nie rozkladają laktozy nie rosnąl na McConkeyu.

Czynniki wirulencji

1. otoczka - utworzone przez polisacharydy hydrofilne, mogą pęcznieć, chronia bakterie przed fagocytoza i litycznym działaniem komplementó. Typ A - kw hialuronowy, typ B - wytwarza hialuronidaze stad otoczka ma nieco inna budowę, sa to monosacharydy mannoza,galaktoza, maraminoza?; typ C bezotoczkowy; typ D - posiada otoczkę zbudowana ze zw podobnego do kw hialuronowego ale nie jest nim, ta otoczka jest oporna na dialanie hialuronidazy,ale podatna na dzialanie heparynazy; typ E - nie wiadomo; typ F - zw podobny do kw hialuronowego, ale zw bardziej oporny na dzialanie enzymow zarówno hialuronidazy i heparynazy.

2. LPS - wykazuje właściwości pirogenne i dizała na system immunologiczny gospodarza,

3. OMPs (białka błony zewn) - poryna o masie 38kDa która niszcy neutrofile gospodarza.

4. fimbrie- zwiększajaa właściwości adherencyjne gospodarza; typ D - dermonekotoksyna

5. neuramidaza - obniża gęstość śluzówki i powoduje destrukcję rzęsek nabłonka oddechowego

6. dermonekrotoksyna tylko typ D z fimbriami- niszczy osteoblasty przegrody nosowej u świń

7. multocydyna / sideofory - wychwytiuja żelazo z kom gospodarza, zaburzenia w metabolizmie

diagnotyka

co przesyłamy do badania - „materiał do badania”, „homogenizat”, „wymaz”

ropa, wysięki wymazy z nosa i gardła, zmienione mleko (odwirować mleko) - od zywych

fragmenty zmienionych narządów, bądź fragmenty tk płucnej - od padłych

bad bezpośrednie -> 1. barwimy gramma - gram minus

2. badanie Loefflera - preparat utrwalamy metanolem, przez kilka sekund, i zalewamy błękitem metylenowym Loefflera 3-5 min, spłukujemy delikatnie ->charakterystyczne agrafki; material z krwi

siejemy na agar z krwia, 5%co2 w pierwszym pasazu, forma S, bez hemolizy, mysi zapach, próba biologiczna - myszy bardzo wrażliwe , homogenizat dootrzewnowo, po 24h wszystkie myszy padają, pobieramy mat z serca, robimy bad bezpośrednie, i z krwi podbieramy czyste kultury bakterii.

M. haemolytica - poczatkowo jedyny przedstawiciel, wyszczególniono z niego inne gatunki (m.in. M.glucosida, ruminalis, verigena,granulomatis); podzielono tez na typy, ale nie ma to znaczenia

Pałęczki zblizone do pasterrella, otoczka polisacharydowa,

Właściwości hodowlane

Agar z krwia (haemolytica - szeroka strefa hemolizy beta), rosnie na Mc conkeyu, toleruje sole żółci, rozkłada laktoze

Wł biochemiczne

Nie wytwarza indolu, nie ma takiego zapachu jak pasterella, rozklada laktoze

Czynniki wirulencji

Bardzo podobne

1. otoczka - chroni przed fagocytoza i dopelniaczem

2. fimbrie - aktywnosc adherencyjna

3. sideofory - wychwytuja zelazo

4. neuraminidaza - obzniza gestosc sluzu na nablonki i destrukcja rzesek

5. !!leutotoksyna/cytolizyna/leukocydyna - wykazuje powinnowactwo do kom płucnych, działanie podobne do streptolizyny, tworzy pory w zaatakowanych kom, pęcherzykach płucnych i w leukocytach ( atakuje leukocyty), z nich wydostaja ste enzymy proteolityczne które uszkadzaja miaższ płucny, niszczy płytki kriw i zaburza funkcje makrofagów.

Diagnostyka

Próbki z górnych dróg oddechowych, wymazy ,wysieki, przy upadkach wycinki płuc

Diag bezpośrednie: 1. rozmaz gram - gram ujemne

2 badanie loeffera

z krwia daje hemolize beta

kolonie jak u pasterella...., bezzapachowe!! Nie wytwarza indolu

Różnicowanie

P. multocida M.haemolytica

Brak właściwosci hemolit ma

Nie rosnie na Mcconkeyu rosnie

Wytww indol nie

Nie rozklada lakt i maltozy rozklada

Bardzo patogenna dla myszy nie

Typ : Proteobacteria

Klasa: Alphaproteobacteria

Rząd: Rhizobiales

Rodzina: Brucellaceae

Rodzaj Brucella

B.meliterisis (3 biotypy)

B.abortus (9)

B.suis (5)

B.ovis- tylko owiec | forma R

B.canis - dla psów | forma R

B.neotomae - nie stwierdzono żeby była patogenna

UWAGA UWAGA UWAGA UWAGA UWAGA UWAGA UWAGA UWAGA

Morfologia

Gem ujemna podobna do pasterelli , male pałeczki do 1,5 mikrometra wielkości, typowa dla nich SŁABOKWASOOPORNA z racji budowy LPS. Nic nie ma...

Wł hodowlane

Podłoże agarowe/bądź bulionowe sojowe z tryptaza, glukozą, i surowicą najlepiej końską (bo przezuwacze najczesciej choruja i mogą mieć przeciwciała), antybiotyki bacetracida, polimyksyna, wankomycyna, nysstatyna; inkubacja w 37 stopniach, w pierwszym pasazu 5-10% CO2, rośnie bardzo powolu, przy negatywnym wyniku trzymamy do 30 dni.

Forma S - szpilkowate kolonie, 0,5-1 mm średnicy, przezroczyste barwy jasnomiodowej, z czasem ciemnieją, dalej sa transparentne, suche,ziarniste, trudnozawieszałe; pierwsze pasaze to formy S ale pozniej przy nastepnych pasazach przechodza szybko w forme R.

Wł biochemiczne

Oksydazo i katalazo - dodatnie, z wyjątkiem ovis i neotomae, VP i MR negatywne, wytw mylazę, siarkowodów- Wytwarzany jest tylko przez abortus-na specjalnym agarze skośnym z paskiem testowym hoduje się je przez 4 dni, nie wytw indolu!,

Czynniki wirulencji

Nie ma zadnych typowych czynnikow wirulencji, bakteria namnaza się wewn komórkowo, uwaza się że wytw determinanty molekularne ( przypuszczenia) , które ułatwiają inwazję, hamują połączenie się fagosomu z lizosomem, hamuja prod czynnika TNF alfa, który bierze w wewnkom zabijaniu. Może wytw czynnik wrazliwy na ogrzewanie i dzialanie proteaz, który ułatwia im przeżycie wewn makrofagów. LPS brucella rózni się od innych kom gram ujemnych, różnice dotycza samego lipidu A który ma wiecej fosfolipidow, yakich jak fosfatydyloglicerol i .... , co powoduje ze sa słabo kwasooporne, nieco inne cukry w oligosacharydzie rdzenia, a na zewnatrz posiada molekuly NH o charakterze, które splataja się z polisach O i tworzą zbitą wartste ochronna dla kom.

Nieco inna budowa formy R - inne cukry

Pałeczki brucella sa stosunkowo oporne na srod zewn - do kilku miesiecy, ale rezerwuarem sa zw chore objawowe i bezobjawowe. Osobniki ciezarne wydalaja duze ilości bakterii z wodami płodowymi, płodem lub wyciekiem z drug rodnych, ale także z mlekiem, bo atakuje gr mlekowy. Brama wejscia jest przewod pokarmowy a główny czynnik to mleko i ser. GORĄCZKA MALTAŃSKA - bardzo wrażliwe są kozy,

Patomorfologia

Zarazek wnika do przewodu pokarmowegoi zostaje sfagocytowany przezz kom M(limfoepiterialne kom o charakt fagocytarnym), ale oczywiście brucella namnaza się w nich przez wezły chlonne krezkowe, do krwi i narzadow miazszowych, atakuje tk miekkie, tworząc ogniska / ziarniny ,które ulegaja zropieniu i z,,,,., u owiec podczas krycia, u samcow w jadrach , u samich łożysko. Erytrypol w łozysku oraz hormony sterydowe, dzialaja stymulujaco na namnazanie paleczek. U ludzi nie ma erytrypolu.

Diagnostyka

Poronienia- płody lub w zoladku płodu, lozsko, macica, siara, mleko, nasienie, zmienione jadra, u ludzi- krew bądź szpik, plyn mozgowo rdzeniowy. Bad bezpos1. gram; 2. !! metoda do wykazanua slabokwasoopornosci, Ziehl-Neelsena w modyfikavji Stampa, fuksyna fen na 3min, splukujemy I zlewamy 1,5 % kw octowym na 30 sek, woda, cos tam I pozostaje czerwona

Badanie serologiczne - OKAP - bezaglutynacji szkielkowej?? - konglomeraty widoczne, antygen brucella????????;/;/;/;/;/;/;/;/;/;/

OA/ OWD - ??

Po 3 tyg ponawiamy badanie jak wyniki sa wątpliwe, gdy znow watpliwe, robimy OMA, sa jakies igmy i cos tak się czegos pozbywamy i nam wychodzi;

OAG (coombsa) - przeciwciała antybrucella sa jednowartosciowe i po polaczeniu z brucella sa niewidoczne, w zwiazku z tym podaje się surowice antyglobulinową, która jest zwrócona przeciw blogulinom która jest 2 biegunowa,,,, nie chuja nie rozumiem o czym ona mowi!!;/ mamy anty costam , królikom podajemy globuline bydleca....;/

1. Zdolność do wzrostu w atmosferze CO2, brucella abortus wymaga CO2, inne nie wymaga

2. wytw siarkowodoru - abortus

3. wytw ureazy - bardzo szybko już po pol godzinie może dojsc do zarózowienia pod kristiensena

4. wzrost w obecnosci barwnikow - tionina, fuksyna zasadowa, dodajemy do agaru i patrzymy które rosna

5. aglutynacja z monospecyficznymi surowicami - costam grupowe AM

6. typowanie przy udziale fagów

Tbilisi - rozcieńćzenia tego faga i dodajemy zawiesine bakterii, abortus i suis ulegaja lizie przy 10do 4

7. Testy oksydatywnyego metabolizmy

Weglowodany

Aminokwasy

---