MIKROBIOLOGIA ćwiczenia 2

Podział wirusów ze względu na rodzaj kwasu nukleinowego.

• Rodziny wirusów posiadające kwas DNA

• Rodziny wirusów posiadające kwas RNA

Diagnostyka wirusologiczna

• Preparat

• Mikroskop świetlny preparat barwiony metodą Giemsy

• Mikroskop elektronowy nie może być jedynym elementem diagnostycznym

• Hodowla

• Żywa zarodki kurze, zwierzęta

• Sztucznie stworzona pierwotna linia komórkowa, ciągła linia komórkowa.

Pierwotna wytwarzana z narządów zwierząt. Ciągła jest robiona z tkanek zwierząt i morze być pasażowana nieskończenie długo.

• Wykrywanie wirusów w hodowlach komórkowych

• Zmiany cytopatyczne liza komórek, martwica komórek, ciała wtrętowe, komórki olbrzymie

• Zjawisko hemadsorpcji

• Zjawisko hemaglutynacji zawijanie wirusów na linii komórkowej

• Interferencja wirusa nie powodującego zmian cytopatycznych z wirusem powodującym zmiany cytopatyczne

• Metody serologiczne

• Test neutralizacji

• Test aglutynacji lateksowe (wykorzystywane w szpitalach)

• Metoda znakowania IF (immunoflurescencja), ELSA (metoda wykożystywana najczęściej w diagnostyce serologicznej), Western-Blot

• Metody genetyczne HAV, HBV, HCV, HDV, HEV, EBV, HPV, HSV, CMV

Metody badań wrażliwości drobnoustrojów na antybiotyki i środki dezynfekcyjne

Antybiotyki to substancje naturalne najczęściej pochodzenia drobnoustrojowego oraz półsyntetyczne i syntetyczne analogi, które oddziaływają w małym stężeniu wybiórczo na struktury i procesy biologiczne, hamują wzrost lub rozrost komórek.

• Naturalne metabolity pleśni, grzybów, bakterii (penicylina benzylowa)

• Półsyntetyczne chemiczna modyfikacja antybiotyku, wyjściowego naturalnego (penicylina)

• Syntetyczne pełna synteza i odtworzenie struktury naturalnej (monotraktany)

Chemioterapełtyki to preparaty o aktywności przeciwdrobnoustrojowej uzyskane drogą syntezy chemicznej nie posiadające wzorca naturalnego (sulfonamidy)

Aktywność biologiczna antybiotyków

• Przeciwbakteryjna

• Przeciwwirusowa

• Przeciwgrzybicza

• Przeciwnowotworowa

• Herbicydowa

Mechanizm działania leku przeciwwirusowego

• Hamowanie syntezy DNA, RNA

• Hamowanie procesu replikacji

Metody badania wrażliwości drobnoustrojów na antybiotyk i chemioterapuetyk

• Metody jakościowe: krążkowo-dyfuzyjna, przeglądowa na jaki drobnoustrój, szczep jest wrażliwy. Pożywka muelekintona. Bada kilka antybiotyków jednorazowo. W metodzie przeglądowej antybiotyk dozowany jest do podłoża.

• Metody ilościowe: seryjne rozcieńczenie antybiotyków w podłożu płynnym lub stałym. Dyfuzyjna (E-test)stosowane przy paciorkowcach.

MIC - najmniejsze stężenie antybiotyku hamujące wzrost drobnoustrojów

MBC - najmniejsze stężenie antybiotyku powodujące śmierć drobnoustrojów

Metody barwienia morfologia drobnoustrojów

• Opis komórki (kształt, wielkość, ułożenie, sposób barwienia)

• Struktury komórkowe (rzęski, otoczka, przetrwalniki, ziarna wolutynowe)

Podział drobnoustrojów ze względu na kształt i ułożenie

• Kuliste

• Dwoiniki Streptococcus pneumonia

• Czwórniaki Tetracoccus sp

• Pakietowce Sciarina sp

• Gronkowce Staphylococcus aureus

• Paciorkowce Streptococcus pyogenes

• Cylindryczne

• Pałeczki Escherichia coli

• Laseczki Clostridium dyficiale

• Formy nieregularne (polimorficzne)

• Spiralne

• Przecinkowce Vibro cholerae

• Śrubowce Spirillum sp

• Krętki Treponema pallidum

Typy ułożenia przetrwalników w komórce bakteryjnej

• Terminalne (biegunowe)

• Subterminalne (podbiegunowe)

• Centralne (środkowe)

• Paracentralne (przyśrodkowe)

Typy urzęsienia komórek bakteryjnych

• Jednorzęsne Vibro cholerae

• Dwurzęsne Campylobacter

• Wielorzęsne Escherichia coli

• Bezrzęsne Atricha

• Jednobiegunowe Helicobacter pylori

• Dwubiegunowe Spirillum sp

• Nietypowe Mobiluncus sp

Typy wzrostu bakterii w podłożach płynnych

• Bezwzględne tlenowce aeroby Micrococcus luteus

• Względne tlenowce Escherichia coli

• Microaerofile Helikobacter pylori

• Bezwzględne beztlenowce anaeroby

• Ścisłe Treponema mikrodenium

• Umiarkowane Bacterioides fragilis

Rodzaje preparatów

• Bezpośredni wykonany z materiału pobranego od pacjenta

• Pośredni wyhodowany z 18-24h hodowli drobnoustrojów

Przygotowanie preparatu

• Odtłuszczenie szkiełka

• Zawiesić kolonie bakterii w kropli NaCl

Przygotowanie preparatu na szkiełku podstawowym

• Wysuszenie rozmazu (ogrzanie wyschniętego preparatu powoduje uszkodzenie komórki)

• Utrwalanie preparatu, wyróżniamy metody chemiczne i fizyczne. Proces ten zabija komórki i powoduje częściową denaturację struktur komórkowych, przeciwdziała zmyciu preparatu podczas barwienia i ułatwia wnikanie barwnika do wnętrza komórki i łączenia się z jego grupami czynnymi.

Metody barwienia pozytywne

Wybarwiamy drobnoustroje dzielimy na proste i złożone (Waysona, Ziehla-Neelsena, Nerssera, Gramma)

Metody barwienia negatywne

Wybarwiamy tło barwniki grubo dyspersyjne.

Barwienie metodą Gramma etapy G+ G-

I - fiolet krystaliczny fiolet fiolet

II - płyn lugola fiolet fiolet

III - odbarwiacz fiolet bezbarwny

IV -fuksyna fiolet czerwony

1