02.03.2009 Gliwice

Sprawozdanie z Biologii Molekularnej i Genetyki Ogólnej

Aleksandra Gatlik

Biotechnologia II semestr

AEI 2

W sekcji: Aleksandra Gatlik i Jan Idzik

Cel: Obserwacja komórek zwierzęcych pod mikroskopemWstęp teoretczny

Komora Bürkera służy do liczenia komórek pod mikroskopem i pozwala na oznaczanie ich ilości w konkretnej objętości. Na powierzchni komory znajdują się są dwa obszary pomiarowe, z wyznaczoną siatką. Każdy powierzchnia pomiarowa jest podzielona na 9 kwadratów. Do obliczania komórek służy tylko 5 kwadratów. Objętość jednego kwadratu wynosi 0,1 mm³, a objętość 10 kwadratów wynosi 1mm³.

Przygotowanie doświadczenia

1. Do dwóch próbówek Eppendorfa zawierających po 30 μl K - 562 dolewamy po 120 μl pożywki aby rozcieńczyć je 5 krotnie.

2. Z przygotowanych już rozcieńczonych substancji ze 150 μl pobieramy 30 μl i wlewamy do czystych próbówek Eppendorfa.

3. Do jednej z próbówek dolewamy 30 μl błękitu trypanowego i mieszamy. Mamy więc mieszaninę w stosunku 1:1

4. Do komory Burkera z obu stron szkiełka nakrywkowego wlewamy po 10 μl wcześniej przygotowanej mieszaniny i podajemy absorpcji światła białego pod mikroskopem, następnie liczymy komórki żywe i martwe:

6 żywe 9 martwych		7 żywych 7 martwych
	3 żywe 5 martwych
2 żywe 6 martwe		4 żywe 7 martwych
4 żywe 11 martwych		2 żywe 4 Martwe
	6 żywe 11 martwych
4 żywe 16 martwych		10 żywe 11 martwych

5. Do drugiej próbówki Eppendorffa która zawiera 5 krotny rozcieńczony roztwór naszych komórek wlewamy 30 μl 0,4 % roztworu erytryny B i mieszamy. Mamy więc mieszaninę w stosunku 1:1 objętościowo.

6. Z przygotowanej mieszaniny bierzemy po 10 μl i wlewamy z każdej strony szkiełka nakrywkowego komory Bruckera. Następnie oddajemy ją działaniu absorpcji światła białego pod mikroskopem i liczymy komórki żywe oraz martwe:

1 żywa 0 martwych		3 żywe 1 martwa
	0 żywe 1 martwa
3 żywe 2 martwe		2 żywe 7 martwych

7 żywe 0 martwych		1 żywych 0 martwych
	3 żywe 0 martwych
10 żywe 0 martwe		5 żywe 2 martwych

Objętość 1 kwadratu: 0.1 mm³

Objętość 10 kwadratów 1 mm³

Obliczenia:

Suma komórek w błękicie trypanowym:

-żywe 51

-martwe 8,6

Średnia, ile komórek przypada na 1 komorę:

-żywe 5,1

-martwe 8,6

Występowanie komórek na 1 ml zawiesiny:

-żywe 5100 = 37,2 %

-martwe 8600 = 62,8%

Suma komórek w 0,4% r-rze erytrozyny

-martwe 13

- żywe 35

Średnia, ile komórek przypada na 1 komorę:

-żywe 3,5

-martwe 1,3

Występowanie komórek na 1 ml zawiesiny:

-żywe 5300 = 73 %

-martwe 1300 = 27%

Wnioski:

Porównując wszystkie odsetki komórek martwych i żywych dla oby dwu barwników możemy stwierdzić, że więcej komórek znajduje się w barwniku erytryny niż w barwniku błękitu trypanowego. Błękit trypanowy jak okazuje się z naszych doświadczeń jest bardziej toksyczny i przyczynia się do śmierci komórek, co możemy ujrzeć w komorach, w których są umieszczone nasze wyniki.

Odsetek komórek żywych wynosi dla erytrozyny aż 73% , natomiast dla błękitu trypanowego 37,2 %. Jak widać różnica jest znaczna i wynosi 35,8 %.