02.03.2009 Gliwice
Sprawozdanie z Biologii Molekularnej i Genetyki Ogólnej
Aleksandra Gatlik
Biotechnologia II semestr
AEI 2
W sekcji: Aleksandra Gatlik i Jan Idzik
Cel: Obserwacja komórek zwierzęcych pod mikroskopemWstęp teoretczny
Komora Bürkera służy do liczenia komórek pod mikroskopem i pozwala na oznaczanie ich ilości w konkretnej objętości. Na powierzchni komory znajdują się są dwa obszary pomiarowe, z wyznaczoną siatką. Każdy powierzchnia pomiarowa jest podzielona na 9 kwadratów. Do obliczania komórek służy tylko 5 kwadratów. Objętość jednego kwadratu wynosi 0,1 mm3, a objętość 10 kwadratów wynosi 1mm3.
Przygotowanie doświadczenia
1. Do dwóch próbówek Eppendorfa zawierających po 30 μl K - 562 dolewamy po 120 μl pożywki aby rozcieńczyć je 5 krotnie.
2. Z przygotowanych już rozcieńczonych substancji ze 150 μl pobieramy 30 μl i wlewamy do czystych próbówek Eppendorfa.
3. Do jednej z próbówek dolewamy 30 μl błękitu trypanowego i mieszamy. Mamy więc mieszaninę w stosunku 1:1
4. Do komory Burkera z obu stron szkiełka nakrywkowego wlewamy po 10 μl wcześniej przygotowanej mieszaniny i podajemy absorpcji światła białego pod mikroskopem, następnie liczymy komórki żywe i martwe:
6 żywe 9 martwych |
|
7 żywych 7 martwych |
|
3 żywe 5 martwych |
|
2 żywe 6 martwe |
|
4 żywe 7 martwych |
4 żywe 11 martwych |
|
2 żywe 4 Martwe
|
|
6 żywe 11 martwych |
|
4 żywe 16 martwych |
|
10 żywe 11 martwych |
5. Do drugiej próbówki Eppendorffa która zawiera 5 krotny rozcieńczony roztwór naszych komórek wlewamy 30 μl 0,4 % roztworu erytryny B i mieszamy. Mamy więc mieszaninę w stosunku 1:1 objętościowo.
6. Z przygotowanej mieszaniny bierzemy po 10 μl i wlewamy z każdej strony szkiełka nakrywkowego komory Bruckera. Następnie oddajemy ją działaniu absorpcji światła białego pod mikroskopem i liczymy komórki żywe oraz martwe:
1 żywa 0 martwych |
|
3 żywe 1 martwa |
|
0 żywe 1 martwa |
|
3 żywe 2 martwe |
|
2 żywe 7 martwych |
7 żywe 0 martwych |
|
1 żywych 0 martwych |
|
3 żywe 0 martwych |
|
10 żywe 0 martwe |
|
5 żywe 2 martwych |
Objętość 1 kwadratu: 0.1 mm3
Objętość 10 kwadratów 1 mm3
Obliczenia:
Suma komórek w błękicie trypanowym:
-żywe 51
-martwe 8,6
Średnia, ile komórek przypada na 1 komorę:
-żywe 5,1
-martwe 8,6
Występowanie komórek na 1 ml zawiesiny:
-żywe 5100 = 37,2 %
-martwe 8600 = 62,8%
Suma komórek w 0,4% r-rze erytrozyny
-martwe 13
- żywe 35
Średnia, ile komórek przypada na 1 komorę:
-żywe 3,5
-martwe 1,3
Występowanie komórek na 1 ml zawiesiny:
-żywe 5300 = 73 %
-martwe 1300 = 27%
Wnioski:
Porównując wszystkie odsetki komórek martwych i żywych dla oby dwu barwników możemy stwierdzić, że więcej komórek znajduje się w barwniku erytryny niż w barwniku błękitu trypanowego. Błękit trypanowy jak okazuje się z naszych doświadczeń jest bardziej toksyczny i przyczynia się do śmierci komórek, co możemy ujrzeć w komorach, w których są umieszczone nasze wyniki.
Odsetek komórek żywych wynosi dla erytrozyny aż 73% , natomiast dla błękitu trypanowego 37,2 %. Jak widać różnica jest znaczna i wynosi 35,8 %.