IZOLACJA WIRUSÓW NA HODOWLACH KOMÓRKOWYCH

konsekwencje i zastosowanie

Hodowla komórkowa = monolayer

Linie komórkowe mogą być:

• półciągłe- są diploidalne, wywodzą się z płodowej tkanki ludzkiej lub zwierzęcej.

Zalety:

Z uwagi na 2n mogą być wykorzystywane do produkcji szczepionek,

np. kurze fibroblasty służą do produkcji szczepionki przeciwko odrze.

Z jednego narządu można uzyskać miliony hodowli.

Wady:

Mają ograniczony czas życia, mogą być pasażowane przez ok.50 pokoleń.

Przykłady: HDCS, MRC-9, WI- 38.

• ciągłe- są aneuploidalne, wywodzą się z guza lub prawidłowych komórek

przechodzących po kolejnych pasażach transformację.

Zalety:

Możliwość nieograniczonego pasażowania (immortalizacja komórek).

Wady:

Złośliwość uniemożliwia wykorzystanie do produkcji szczepionek.

Przykłady: HeLa (rak szyjki macicy), Hep-2 (nabłonek), Vero (nerka małpy),

MDCK (nerka psa).

Hodowle komórkowe pozwalają na uzyskanie wysokiego miana wirusa obecnego

w materiale klinicznym przez długi czas. Hodowle na masową skalę czyli hodowla stale dzielących się komórek w zawiesinie w fermentatorach wykorzystuje się do produkcji interferonu dla celów terapeutycznych i szczepionek.

Wady hodowli to:

• konieczność opracowania materiału przed zakażeniem linii,

• niepełna (wstępna) identyfikacja,

• selektywność (tzn. nie istnieje linia wrażliwa na zakażenie wszystkimi wirusami dlatego dobiera się ją w sposób ukierunkowany lub nieukierunkowany),

• wysoki koszt,

• wymóg doświadczenia i ryzykowność.

Badanie niekiedy trwa bardzo długo- do kilku tygodni, może dać wynik fałszywie dodatni (np. zmiany podobne do CPE mogą wynikać z działania substancji toksycznych, wyizolowanie wirusa nie będącego czynnikiem etiologicznym danego schorzenia) ale i fałszywie ujemny (np. zły dobór linii, zbyt mała ilość wirusa w materiale). Jedyne pewne rozpoznanie to izolacja wirusa z miejsc fizjologicznie jałowych.

Ponadto istnieją ograniczenia- nie wszystkie wirusy namnażają się łatwo na hodowlach komórkowych.

Z trudem izoluje się: Nie udaje się hodować:

HIV WZW typu B, C, D, E

wirus KZM HPV

koronarowirusy kaliciwirusów

filowirusy

poliomawirusy

parwowirusy

HHV-6, -7, -8

EBV

Częściowo tych utrudnień udaje się uniknąć stosując technikę SVA (shell vial assay)- metodę niewymagającą opracowania materiału przed zakażeniem; jest ona jednak mniej czuła niż klasyczna izolacja.

2

---