grupa 6

Bartłomiej Pająk,

Mateusz Wiechetek,

Maciej Korkuć,

Łukasz Szarek,

Maciej Biedruna,

Michał Birek

Temat: Analiza wybranych grup mikroorganizmów występujących w powietrzu. Analiza mikrobiologiczna wody.

Cel: Celem doświadczenia było przeprowadzenie oceny stopnia zanieczyszczenia powietrza (w sali oraz na korytarzu pod względem mikrobiologicznym) oraz wody (poprzez zbadanie ogólnej liczby bakterii mezofilnych i psychrofilnych oraz wskaźników zanieczyszczenia kałowego - bakterii Escherichia coli).

Sposób wykonania:

• Powietrze było badane w sali oraz na korytarzu. Doświadczenie przeprowadziliśmy dwoma metodami:

a)

Metoda sedymentacyjna polega na opadaniu z powietrza mikroorganizmów na podłoże stałe w określonym czasie.

Szalki położyliśmy w odpowiednim miejscu do badania i zdjęliśmy wieczka. Pozostawiliśmy na okres 10 minut szalki z agarem odżywczym oraz na 30 minut pozostałe płytki. Następnie szalki te zostały poddane inkubacji.

b)

Metoda zderzeniowa polega na wychwytywaniu mikroorganizmów w wyniku działania siły uderzeniowej określonej objętości powietrza, skierowanej na podłoże.

W naszym przypadku użyliśmy 100 l powietrza w ciągu 60 sekund. Szalki zostały później poddane inkubacji.

bakterie	temeperatura	podłoże	czas hodowli
psychrofilne	20-22˚C	agar odżywczy	3 dni
mezofilne	37˚C	agar odżywczy	1 dzień
gronkowce	37˚C	Chapmana	1-2 dni
grzyby	26˚C	Sabouraud	6 dni
promieniowce	26˚C	Pochona	6 dni

• Nasza analiza obejmowała wodę powierzchniową, którą pobrano wcześniej z zalewu w Skierniewicach. Badanie ogólnej liczby bakterii psychrofilnych i mezofilnych przeprowadziliśmy, stosując posiew głębinowy. Wykonaliśmy szereg rozcieńczeń od 10^-3 do 10^-6. Pozostawiliśmy bakterie do inkubacji (bakterie psychrofilne - temp. 20°C, 72 h; mezofilne - temp. 37°C, 24 h).

Do badania występowania bakterii grupy coli sporządziliśmy podwójny szereg rozcieńczeń badanej wody (10-1 - 10-6), a następnie wykonaliśmy posiew na podłoże laktozowe z purpurą bromokrezolową. Zaszczepione podłoże postawiono do inkubacji w temp. 37°C.

Zestawienie i omówienie wyników:

• Tydzień po przeprowadzonej analizie powietrza obejrzeliśmy otrzymane wyniki. Policzyliśmy ilość powstałych kolonii. W przypadku metody zderzeniowej poprawiliśmy otrzymane wyniki, zgodnie z tabelą, dołączoną do aparatu Mercka. Następnie zamieściliśmy otrzymane ilości kolonii bakterii w tabeli:

	sala		korytarz
metoda	sedymentacyjna	zderzeniowa	sedymentacyjna	zderzeniowa
ogólna liczba bakterii	37	439	46	1187
psychrofilne	26	151	25	191
-sporowe	4	4	1	6
-pigmentowe	13	127	14	151
mezofilne	11	174	21	337
gronkowce	20	25	10	25
promieniowce	5	0	1	2
pleśnie	9	61	5	22
drożdże	1	3	10	5

Następnie zajęliśmy się obliczeniem ilości mikroorganizmów w 1 m³ badanego powietrza. Dla metody sedymentacyjnej policzyliśmy ją według wzoru:

gdzie:

X - ilość mikroorganizmów w 1m³ powietrza,

a - średnia ilość kolonii na powierzchni podłoża,

-powierzchnia płytki płytki Petriego w cm²,

=3,14*(4,5)²=63,585cm²

t - czas ekspozycji w minutach

Oto otrzymane końcowe wyniki ilości mikroorganizmów w 1 m³ powietrza:

	sala		korytarz
metoda	sedymentacyjna	zderzeniowa	sedymentacyjna	zderzeniowa
ogólna liczba bakterii	2909 jtk/m^3	4390 jtk/m^3	3617 jtk/m^3	11870 jtk/m^3
psychrofilne	2045 jtk/m^3	1510 jtk/m^3	1966 jtk/m^3	1910 jtk/m^3
-sporowe	315 jtk/m^3	40 jtk/m^3	79 jtk/m^3	60 jtk/m^3
-pigmentowe	1022 jtk/m^3	1270 jtk/m^3	1101 jtk/m^3	1510 jtk/m^3
mezofilne	865 jtk/m^3	1740 jtk/m^3	1651 jtk/m^3	3370 jtk/m^3
gronkowce	524 jtk/m^3	250 jtk/m^3	262 jtk/m^3	250 jtk/m^3
promieniowce	131 jtk/m^3	0 jtk/m^3	26 jtk/m^3	20 jtk/m^3
pleśnie	236 jtk/m^3	610 jtk/m^3	131 jtk/m^3	220 jtk/m^3
drożdże	26 jtk/m^3	30 jtk/m^3	262 jtk/m^3	50 jtk/m^3

• Na kolejnych zajęciach po wykonaniu doświadczenia zliczyliśmy ilość kolonii bakterii

na szalkach:

rozcieńczenie		10^-6	10^-^5	10^-^4	10^-^3
Ogólna liczba bakterii	psychrofilne	5	2	9	7
		mezofilne	0	0	0	2

Możemy zauważyć, że w wynikach wykonania posiewu nie został zachowany właściwy stosunek pomiędzy ilością bakterii na kolejnych posiewach. Mogło to być spowodowane błędem przy odmierzaniu pobieranej cieczy lub złym zliczaniem. Do obliczania ilości mikroorganizmów w 1 ml skorzystałem ze średniej wartości przy rozcieńczeniu 10^-5 i 10^-4 dla bakterii psychrofilnych i ilości kolonii bakterii przy rozcieńczeniu 10^-3 dla bakterii mezofilnych.

ilość bakterii psychrofilnych: (200000+90000)/2= 1,45*10⁵ jtk/ml

ilość bakterii mezofilnych: 2*10³ jtk/ml

W przypadku badania występowania bakterii grupy coli za wynik pozytywny uznawaliśmy pojawienie się gazu w rurce Durhama oraz zmianę barwy z fioletowej na żółtą, będącą wynikiem zakwaszenia. Oto otrzymane wyniki:

Rozcieńczenie	10^-^1	10^-^2	10^-^3
Wynik w 1 szeregu rozc.	+	-	-
Wynik w 2 szeregu rozc.	+	-	-

Następnie dokonaliśmy odczytu ( 2-0-0) NPL w 100 cm³ i miana coli:

NPL = 23*100=2300

Miano coli =4

Wykonaliśmy również test szybki w temp. 44°C dla próbki z wynikiem pozytywnym i pierwszej z wynikiem negatywnym w celu wykrycia bakterii coli typu kałowego (Escherichia coli) . Materiał z wyżej wymienionych hodowli przesialiśmy na podłoże płynne z zielenią brylantową oraz na wodę peptonową z tryptofanem. Do hodowli dodaliśmy po ściance próbówki kilka kropel odczynnika Ehrlicha-Böhme'a. Po chwili w próbówce o wyniku pozytywnym zaobserwowaliśmy pojawienie się na granicy płynów czerwonego zabarwienia, co świadczyło o obecności indolu.

Wynik NPL oraz miana coli jest identyczny, w przypadku bakterii grupy coli, jak i bakterii grupy coli typu kałowego.

Wnioski i uwagi:

Stężenie zsumowanych bakterii i grzybów w sali metodą sedymentacyjną wynosi 3,826*10³ jtk/m³, metodą zderzeniową 5,280*10³ jtk/m³, natomiast na korytarzu metodą sedymentacyjną 4,298*10³ jtk/m³ i zderzeniową 1,241*10⁴ jtk/m³. Łatwo możemy zauważyć, że metoda zderzeniowa jest dużo dokładniejsza niż sedymentacyjna, ponieważ potrafi wykryć więcej mikroorganizmów. Stężenie mikroorganizmów chorobotwórczych na korytarzu jest większe niż w sali. Porównując nasze wyniki z normą Krzysztofika 1992, w której ogólna liczba mikroorganizmów MPA wynosi 2,0*10³, zauważymy, że nasze wartości są od niej większe. Podobnie dla normy Topley'a 1955 (najwyższe dopuszczalne stężenie w szkołach powinno wynosić 2,825*10³ CFU/m³) nasze wyniki są za duże. Jednak nasze wartości znajdują się w przedziale 1,0*10³ do 1,0*10⁴ CFU/m³, zgodnie z normą Lucey'a 1988 o powietrzu niezanieczyszczonym. Jedynie stężenie na korytarzu liczone metodą zderzeniową jest minimalnie zawyżone. Jak widzimy, wszystko zależy od interpretacji zanieczyszczenia przez autorów norm.

Wartość dopuszczalna liczby bakterii Escherichia coli na 100 ml w zbiornikach wodnych wynosi 1000. Określona przez nas wartość NLP = 2300 przekracza tą wartość, co oznacza, że nie wolno nam się kąpać w tym zbiorniku.

4

---