Joanna Mikuła

Gr 036 (A) OSDM

Sprawozdanie - białka

Temat doświadczenia 1:

Reakcja Sorensena z aldehydem mrówkowym.

Reakcja ta służy do ilościowego oznaczania aminokwasów. Aminokwasy w wodnych roztworach mają charakter soli. Nie można ich bezpośrednio miareczkować zasadą, ponieważ cofnięcie dysocjacji grupy NH₃ do NH₂ zachodzi dopiero przy pH około 12. Jest ono trudne do uchwycenia z powodu braku odpowiednich wskaźników.

wskaźników naszym doświadczeniu ominęliśmy tę trudność stosując aldehyd mrówkowy. Reaguje on z grupami NH₂ i uwalnia się pewna ilość protonów. Powoduje to obniżenie wartości pH do około 9 i końcowy punkt miareczkowania przesuwa się w zakres zmiany barwy fenoloftaleiny.

Obserwacje:

Probówka 1:

10 cm ³ glicyny + 4 krople fenoloftaleiny + roztwór NaOH = blado różowe zabarwienie

Probówka 2:

10 cm ³ formaldehydu + 4 krople fenoloftaleiny + roztwór NaOH= słabo różowe zabarwienie

Probówka 3:

Zawartość probówki 1+ zawartość probówki 2 = odbarwienie roztworu.

Ilość NaOH zużyta do miareczkowania roztworu w probówce 3 do momentu pojawienia się różowego zabarwienia wyniosła 1,2 cm ³

Obliczenia:

1. Zawartość glicyny:

Zawartość glicyny = 1,2 cm ³ * 0,0075 g/ cm ³ = 0,009 g

2. Zawartość azotu amonowego:

Zawartość azotu = 1,2 cm ³ * 1,4 = 1,68 mg/ cm ³

Wnioski z przeprowadzonego doświadczenia:

Po zmieszaniu obu roztworów nastąpiło odbarwienie roztworu. Spowodowane jest to zablokowaniem grup aminowych.

Temat doświadczenia 2:

Reakcja z ninhydryną.

Jest to metoda ilościowego oznaczania aminokwasów metodą kolorymetryczną. Aminokwas w środowisku kwaśnym ogrzewany z nadmiarem ninhydryny ulega dekarboksylacji, a co za tym idzie przekształca się w niższy aldehyd. Z kolei zredukowana ninhydryna wchodzi w reakcję kondensacji z nadmiarem ninhydryny niezredukowanej i amoniakiem. Tworzy się związek o zabarwieniu niebiesko- fiołkowym\

Obserwacje:

Probówka:

1 cm ³ glicyny + 0,5 cm ³ ninhydryny + wysoka temperatura (ogrzewanie) = niebiesko- fiołkowe zabarwienie

Wnioski z przeprowadzonego doświadczenia:

W probówce, w której znajdowała się glicyna i ninhydryna pod wpływem ogrzewania pojawiło się zabarwienie niebiesko - fiołkowe, które świadczy o tym, iż zredukowana ninhydryna weszła w reakcję z ninhydryną niezredukowaną oraz amoniakiem pochodzącym z procesu dekarboksylacji aminokwasu.

Temat doświadczenia 3:

Reakcja cystynowa.

Jest to reakcja charakterystyczna do cystyny i cysterny. Z grupy tiolowej cysteiny oraz z ugrupowania disiarczkowego cystyny w środowisku alkalicznym odczepia się siarka i przechodzi do roztworu. Obecność odłączonych jonów siarki możemy wykryć dodając do roztworu octanu ołowiu (II). Z połączenia siarki i ołowiu powstaje siarczek ołowiu (II), który wytrąca się w probówce w postaci czarnego osadu.

Obserwacje:

Probówka 1:

1 cm ³ cysteiny + 2 cm ³ NaOH + temperatura (ogrzewamy)+ 4 krople Pb (CH3COO)₂ + temperatura (ogrzewamy) = Brunatnoczarny osad PbS

Probówka 2:

1 cm ³ cysteiny + 2 cm ³ NaOH + temperatura (ogrzewamy)+ 4 krople Pb (CH3COO)₂ + temperatura (ogrzewamy) = Brunatnoczarny osad PbS

Wnioski z przeprowadzonego doświadczenia:

W obu probówkach pojawił się brunatnoczarny osad. Świadczy to o tym, iż z obu roztworów odłączyły się jony siarki, które następnie weszły w reakcję z ołowiem pochodzącym z octanu ołowiu (II). Powstały związek wytrącił się w postaci osadu PbS.

Temat doświadczenia 4:

Wykrywanie metioniny metodą McCarthy- Sullivana.

Jest to reakcja charakterystyczna dla metioniny. Reakcja ta zachodzi w środowisku kwaśnym.

Obserwacje:

Probówka 1:

2,5 cm ³ metioniny + 0,5cm ³ stęż. NaOH + 3 krople nitroprusydku sodu + 0,5cm ³ glicyny + temperatura 40- 80 º (ogrzewamy10 min.) +5cm ³ stęż. HCl = różowobrunatne zabarwienie

Probówka 2:

2,5 cm ³ H₂O + 0,5cm ³ stęż. NaOH + 3 krople nitroprusydku sodu + 0,5cm ³ glicyny + temperatura 40- 80 º (ogrzewamy10 min.) +5cm ³ stęż. HCl = żółtozielone zabarwienie

Wnioski z przeprowadzonego doświadczenia:

Wynik, jaki wyszedł w moim doświadczeniu (różowobrunatne zabarwienie) mówi nam, że miałam do czynienia z metioniną. Kompleks barwny, który powstał mówi nam, że w środowisku kwaśnym, metionina uległa reakcji.

Temat doświadczenia 5:

Reakcja ksantoproteinowa.

Jest to reakcja charakterystyczna dla aminokwasów aromatycznych. Reakcja ta pomaga nam wykryć aminokwasy z pierścieniem aromatyczny Aminokwasy aromatyczne podczas ogrzewania ze stężonym HNO₃ tworzą pochodne nitrowe, które w środowisku alkalicznym przyjmują zabarwienie pomarańczowe.

Obserwacje:

Probówka 1:

1 cm ³ tyrozyny + 2 cm ³ stęż. HNO₃ + temperatura (ogrzewamy) = kolor żółty

Probówka 2:

Zawartość probówki 1 ochładzamy + NaOH = barwa pomarańczowa.

Wnioski z przeprowadzonego doświadczenia:

Pochodne nitrowe tyrozyny, które powstały w probówce 1 pod wpływem środowiska alkalicznego przyjęły zabarwienie pomarańczowe. Reakcja ta pokazała nam, że tyrozyna w swojej budowie posiada pierścień aromatyczny.

Temat doświadczenia 6:

Wykrywanie tyrozyny. Reakcja Millona.

Jest to reakcja charakterystyczna dla tyrozyny. Tyrozyna pod wpływem odczynnika Millona i pod wpływem temperatury daje nam zabarwienie czerwone. Zabarwienie to pochodzi od kompleksu rtęciowo- fenolowo -nitrowego. Zachodzi ona w środowisku kwaśnym.

Obserwacje:

Probówka 1:

1 cm ³ tyrozyny + 4 krople odczynnika Millona + temperatura (ogrzewamy) = czerwone zabarwienie.

Wnioski z przeprowadzonego doświadczenia:

Reakcja ta wykazała nam, iż tyrozyna posiada pierścień. Podczas tej reakcji powstał kompleks rtęciowo- fenolowo- nitrowy, o czym świadczyło czerwone zabarwienie.

Temat doświadczenia 7:

Wykrywanie tryptofanu. Reakcja Adamkiewicza- Hopkinsa.

Reakcja ta pomaga nam wykryć obecność tryptofanu a dokładniej występującego w nim układu indolowego. Układy indolowe w połączeniu z aldehydami w środowisku kwaśnym dają barwne produkty.

Obserwacje:

Probówka 1:

1 cm ³ tryptofan + 4 krople kwasu octowego + podważamy stęż. H₂SO₄ = na granicy obu płynów powstał fiołkowy pierścień.

Wnioski z przeprowadzonego doświadczenia:

Wynik doświadczenia mówi nam, iż tryptofan posiada grupy indolowe, które w środowisku kwaśnym reagowały z ugrupowaniami aldehydowymi pochodzącymi z kwasu octowego. Wynikiem tej reakcji był kompleks barwny a mianowicie pierścień fiołkowy, który powstał na granicy obu płynów.

Temat doświadczenia 8:

Wykrywanie tryptofanu. Reakcja Voisenta.

Tak samo jak reakcja Adamkiewicza- Hopkinsa reakcja Voisenta pomaga nam wykryć obecność tryptofanu a dokładniej występującego w nim układu indolowego. Układy indolowe w połączeniu z aldehydami w środowisku kwaśnym dają barwne produkty.

Obserwacje:

Probówka 1:

1 cm ³ tryptofan + 1 kropla aldehydu mrówkowego + 6 cm ³ stęż. HCl + temperatura + azotan (III) sodu = fiołkowe zabarwienie

Wnioski z przeprowadzonego doświadczenia:

Wynik doświadczenia mówi nam, iż tryptofan posiada grupy indolowe, które w środowisku kwaśnym reagowały z ugrupowaniami aldehydowymi pochodzącymi z aldehydu mrówkowego. Wynikiem tej reakcji było fiołkowe zabarwienie.

Temat doświadczenia 9:

Wykrywanie argininy. Reakcja Sakaguchi`ego.

Reakcja ta jest charakterystyczna dla argininy. Pomaga ona nam w ilościowym oznaczeniu argininy. Arginina posiada w swojej budowie reszty guanidyny, które w środowisku zasadowym i w obecności bromianu (I) sodu reagują z α - naftolem dając kompleksy o barwie różowopomarańczowej.

Obserwacje:

Probówka 1:

1 cm ³ argininy +1 cm ³ NaOH +3 krople α - naftolu + woda bromowa = różowopomarańczowej zabarwienie roztworu.

Wnioski z przeprowadzonego doświadczenia:

Kompleks barwy różowopomarańczowej, który był wynikiem mojego doświadczenia świadczy o tym iż reszty guanidyny obecne w argininie w środowisku zasadowym i w obecności bromu pochodzącego z wody bromowej uległy reakcji z α - naftolem.

Temat doświadczenia 10:

Denaturacja białek.

1. Denaturacja cieplna.

Jest to reakcja nieodwracalnej zmiany zachodzącej w białku pod wpływem temperatury.

Obserwacje:

Probówka 1:

2 cm ³ białka jaja kurzego + 2 krople kwasu octowego + temperatura (ogrzewamy.) = biały osad białka

Probówka 2:

2 cm ³ albuminy + 2 krople kwasu octowego + temperatura (ogrzewamy.) = biały osad białka, który zaczyna zanikać

Wnioski z przeprowadzonego doświadczenia:

Białko jaja kurzego składa się z albumin i globulin. W probówce, 2 w której była albumina wytrącił się biały osad, który po pewnym czasie zaczął zanikać. W probówce, 1 w której znajdowało się białko jaja kurzego, czyli albuminy i globuliny powstał biały osad białka, który utrzymywał się przez cały czas. Spowodowane jest to tym, iż albumina i globulina zlepiły się w duże, trwałe agregaty.

2. Działanie etanolu.

Jeżeli podziałamy etanolem na białko w krótkim czasie to proces denaturacji nie zajdzie. Działanie etanolu powoduje wytrącenie się osadu rozpuszczalnego w wodzie, ale nie powoduje denaturacji.

Obserwacje:

Probówka 1:

1 cm ³ białka jaja kurzego + 3 cm ³ etanolu = biały osad

Probówka 2:

1 cm ³ albuminy + 3 cm ³ etanolu = biały osad bardziej rozpuszczalny

Wnioski z przeprowadzonego doświadczenia:

Wynikiem mojego doświadczenia było wytracenie się białego osadu. Spowodowane to było podziałaniem etanolem na białko w krótkim czasie. Spowodowało to wytracenie białka z roztworu, ale nie zaszedł proces denaturacji, czyli reakcja była odwracalna (osad był rozpuszczalny w wodzie).

3. Działanie stężonego HNO₃.

Jest to proces nieodwracalny. Stężony HNO₃ niszczy struktury wyższego rzędu w białku. Rekcja ta ma zastosowanie do wykrywania białka w moczu.

Obserwacje:

Probówka 1:

1 cm ³ Stężon. HNO₃ + 1 cm ³ białko jaja kurzego = na granicy faz pojawił się biały pierścień wytrąconego białka

Probówka 2:

1 cm ³ Stężon. HNO₃ + 1 cm ³ albuminy = na granicy faz pojawił się biały pierścień wytrąconego białka, który po pewnym czasie zanikł.

Wnioski z przeprowadzonego doświadczenia:

Na granicy obu faz pojawił się biały pierścień, który jest oznaką wytrącania się biała z roztworu.

Temat doświadczenia 11:

Reakcja biuretowa (Piotrowskiego).

Jest to reakcja barwna charakterystyczna dla wiązań peptydowych w białku. Zachodzi ona w środowisku zasadowym, w którym tworzą się połączenia kompleksowe o zabarwieniu fiołkowym.

Obserwacje:

Probówka 1:

2 cm ³ białko jaja kurzego +2 cm ³ 10% NaOH +3 krople 1% CuSO₄ = Barwa fioletowa.

Probówka 2:

2 cm ³ albumina +2 cm ³ 10% NaOH +3 krople 1% CuSO₄ = Barwa niebieska.

Wnioski z przeprowadzonego doświadczenia:

Zabarwienie roztworu świadczy o tym, iż białko posiada wiązania peptydowe. W probówce 1 otrzymałam kolor fioletowy, ponieważ białko jaja kurzego składa się z albuminy i globuliny, które posiadają łącznie większą ilość wiązań peptydowych niż sama albumina wzięta do reakcji w probówce 2. Powyższa reakcja może służyć również do ilościowego oznaczania zawartości białek w roztworze- im bardziej intensywne zabarwienie tym więcej białka.

7

---