8 wykład, Mikrobiologia


16.04

WODA

Bakterie z grupy coli

Bakterie z grupy coli to przede wszystkim szczepy Escherichia coli oraz drobnoustroje z rodzaju Enterobacter, Citrobacter i Klebsiella. Wykrywane są one na podłozach z laktozą po inkubacji w temperaturze 37oC.

Bakterie z grupy coli typu kałowego (termotolerancyjne) to głównie szczepy E.coli i tylko nieliczne szczepy z rodzajów Enterobacter, Citrobacter i Klebsiella, które mają zdolność fermentacji laktozy w temperaturze 44oC.

Obecność w badanej próbce wody bakterii z gr coli ( zanieczyszczenie wody ściekami, glebą , gnijącym materiałem roślinnym lub kałem)

bakterii grupy coli typu kałowego świadczy o stosunkowo świeżym zanieczyszczeniu wody kałem.

Dla większości rodzajów wód zalecane jest oznaczanie liczby bakterii obu grup coli.

Woda-Liczba pałeczek gr coli metodą filtrów membranowych

Przefiltrować 2 porcje po 100cm3 przez filtry celulozowe o średnicy porów 0,45μm

filtry umieścić w płytkach na powierzchni podłoża wybiórczego- agar z tergitolem

inkubacja E.coli- w temp. 44 oC/24h

pałeczki gr coli - w temp 37o C/24h

policzyć charakterystyczne żółte kolonie pałeczek gr coli.

Na agarze laktozowym z solą tetrazolową TTC z tergitolem:

o prodkcji kwasu z laktozy świadczy zmiana zabarwienia wskaźnika zmian pH- błękitu bromotymolowego z zielonego na żółty.

Tergitol hamuje wzrost bakterii Gram- dodatnich

Bakterie z gr coli rosną w postaci żółto- pomarańczowych kolonii z wyraźnym zażółceniem pożywki pod powierzchnią filtra.

Inne bakterie G- np. Proteus sp. czy Pseudomonas sp. rosną na tym podłożu w postaci kolonii o barwie czerwonej.

Obecność bakterii gr coli(przede wszystkim E.coli) jest dowodem skażenia wody zanieczyszczeniami fekalnymi, często wskazuje na problemy z jej uzdatnianiem.

Jakość wody- Metoda filtracji membranowej

E.coli i bakterie grupy coli

  1. Przygotowanie próbki

  2. Posiew na podłoże selektywne- Agar TTc

  3. Test potwierdzenia

- test na oksydazę

- test na wytwarzanie indolu

Wskaźniki bakteriologiczne jakości wody do picia

Wymagania mikrobiologiczne

Wymagania podstawowe:

E coli 0 w 100cm3

Enterococcus sp 0 w 100cm3

Wymagania dodatkowe

bakterie gr coli 0 w 100cm3

liczba bakterii tlenowych rosnących w 36 oC po 48 do 50jtk w 1 cm3

l. bakterii tlenowych rosnących w 22oC po 72h do 100 jtk w 1cm3

Clostridium perfringens 0w 100cm3

Woda- Oznaczanie miana drobnoustrojów

Miano jest to najmniejsza objętość badanego produktu, w którym znajduje się przynajmniej jedna żywa komórka badanej bakterii.

Oznaczenie miana służy do określenia stopnia zanieczyszczenia badanego produktu.

Określenie miana coli świadczy o zanieczyszczeniu fekalnym.

Oznaczanie NPL i miana bakterii z gr coli metodą fermentacyjno- probówkową

Najbardziej prawdopodobna liczba bakterii z gr coli (NPL)- liczba bakterii z gr coli w 100cm3 badanej próbki wody lub ścieków określona (z tablic) na podstawie rachunku prawdopodobieństwa.

Miano coli- najmniejsza objętość badanej wody lub ścieków wyrażona w cm3, w której stwierdza się jeszcze obecność bakterii grupy coli.

Wskaźniki bakteriologiczne jakości wody do picia

Miano coli jest wartością niemianowaną

Jeśli miano coli wynosi 10 tzn., ze w 10ml znajduje się co najmniej 1 komórka bakterii z gr coli.

Wartość miana coli jest odwrotnie proporcjonalna do stopnia zanieczyszczenia wody.

Oznaczanie bakterii z gr coli metodą fermentacyjno- probówkową.

Bakterie z gr coli można wykryć metodą fermentacyjno- probówkowa, a wynik podać jako miano coli.

Wykrywanie tych bakterii oparte jest na zdolności do fermentowania laktozy z wytworzeniem w podłozu kwasu oraz gazu.

W przypadku, kiedy dopuszczalne miano coli wynosi:

100 (np.woda pitna)- wysiewa się = 50ml i 5 x 10ml

50- wylewa się= 5x 10ml i 1 ml oraz 0,1ml

10- wysiewa się= 2x 10ml i 1ml oraz 0,1ml

Wykrywanie bakterii grupy coli metodą fermentacyjni- probówkową( FP)

Etap I -Badanie wstępne

Polega ono na posiewie na podłoże płynne z laktozą i purpurą bromokrezolową ( podłoże LPB, Eijkamana)

posiane próbki inkubowane są w temp. 37OC przez 24-48h

za wynik dodatni uznaje się obecność gazu w rurkach Durhama lub występowanie pęcherzyków gazu w podłożu i zmianę barwy z fioletowej na żółtą.

Zmian te wskazują na wzrost bakterii i fermentację laktozy z wytworzeniem kwasu i gazu.

Etap II - Badanie potwierdzające

Badanie to wykonuje się w celu potwierdzenia obecności bakterii z gr coli.

Badanie potwierdzające wykonuje się na pożywce Endo- zawiera fuksynę zasadową oraz siarczan sodowy, hamujące wzrost G+

  1. Posiać metodą powierzchniową za pomocą ezy niewielką ilość hodowli bakterii z podłoża (LPB) na podłoże Endo

  2. Inkubować hodowlę w temp. 37OC w ciągu 24h

(w przypadku E.coli zawiesinę bakterii z hodowli na podłożu LPB przenieść ezą na podłoże laktozowe z zielenią brylantową i inkubować w temp. 44OC w ciągu 18-24h);

Za wynik dodatni przyjmuje się wzrost kolonii ciemnoczerwonych z charakterystycznym metalicznym połyskiem.

W wyniku wzrostu bakterii wykorzystujących laktozę następuje uwalnianie fuksyny do podłoża, która barwi charakterystycznie bakterie występujące w kolonii.

Etap III- Badanie uzupełniające

Jest to dalszy etap badania potwierdzającego i stosuje się je w przypadku, gdy na pożywce Endo wyrosnę nietypowe kolonie podejrzane o przynależność do gr coli.

Badania obejmują:

Paciorkowce kałowe

Paciorkowce kałowe to grupa bakterii kulistych lub owalnych , G+, występujących w postaci komórek pojedynczych, dwoinek lub krótkich łańcuszków.

Obejmuje ona drobnoustroje z rodzajów Enterococcus i Streptococcus m.in. E. Faecalis, E.faecium, S equinus i S. bovis

Występują one powszechnie w kale ludzi i zwierząt.

Stwierdzenie obecności paciorkowców kałowych w badanej próbie świadczy o kontakcie z zanieczyszczeniami typu kałowego, podobnie jak obecność bakterii z gr coli.

Występowanie enterokoków w liczbie znacznie przewyższającej liczbę bakterii z gr coli, sugerować może zanieczyszczenie wody kałem zwierzęcym lub ściekami pochodzącymi z ferm hodowlanych.

Liczba paciorkowców kałowych z rodzaju Enterococcus:

Enterococcus sp. rosną w postaci różowych lub bordowych drobnych kolonii na podłożu Slanetz'a i Bartley'a.

Obecnośc paciorkowców kałowych w badanej wodzie świadczy o świeżym zanieczyszczeniu wody.

Podłoże Slanetz iBartley

Enterokoki są bardziej odporne na różne metody uzdatniania i dezynfekcji niż bakterie gr coli

Najważniejsze cechy charakterystyczne z tej gr bakterii to:

Testy potwierdzające:

Laseczki z rodzaju Clostridium

Clostridia redukujące siarczyny są bardzo dobrym wskaźnikiem prawidłowości prowadzonych procesów uzdatniania wody

Przetrwalniki tych bakterii, a wraz z nimi również cysty pasożytniczych pierwotniaków (Cryptosporidium parvum, Giardia lamblia) powinny być wyeliminowane właśnie w tych etapach uzdatniania wody, gdyż są one bardzo odporne na działanie środków dezynfekcyjnych.

Wykrycie bakterii z rodzaju Clostridium jest technicznie znacznie bardziej proste od poszukiwania pierwotniaków pasożytniczych i daje duzą pewność, że woda uzdatniona jest wolna od pierwotniaków i jej robaków chorobotwórczych (helmintów)

Liczba Clostridium perfringens

Beztlenowe laseczki Clostridium perfringens ze względu na zdolność do tworzenia przetrwalników wykazują żywotność podczas długotrwałego przebywania w niekorzystnych warunkach

Ich obecność w badanej wodzie może świadczyć o odległym w czasie zanieczyszczeniu

Przetrwalniki Clostridium perfringens bardzo oporne na działanie środków dezynfekcyjnych są doskonałym wskaźnikiem procesów uzdatniania i dezynfekcji wody.

Metoda oznaczania w podłożu płynnym

Bakterie z rodzaju Legionella

Agar Legionella GVPC - wybiórcza izolacja Legionella

Podłoże BCYE (Buffered Charcoal Yeast Extract) Agar

Pseudomonas aeruginosa

Dlaczego kontrolujemy jakość sanitarną wody?

Drobnoustroje chorobotwórcze przenoszone drogą wodną

  1. Bakterie

Bezwzględnie chorobotwórcze:

Oportunistyczne (wzlgędnie chorobotwórcze):

2. Wirusy

Np. wirus polio wywołujący porażenie dziecięce, enterowirusy wywołujące schorzenia jelit

3. Pierwotniaki

Np. Giardia lamblia wywołuje gardiozę. Entamoeba histolytica wywołuje amebozę itd.

Większość pierwotniaków produkuje cysty, które nie są w stanie przetrwać poza organizmem gospodarza w niekorzystnych warunkach środowiskowych. Gdy warunki te ulegają poprawie z cyst rozwijają się tzw. trofozoity, postacie wegetatywne występujące u człowieka.

4. Robaki pasożytnicze

Np. glista ludzka, tasiemce, przywry. Pasożyty ludzkie w zasadzie nie wchodzą w zakres badań mikrobiologicznych, jednakże z innymi patogenami stanowią poważne zagrożenie zdrowia człowieka. Infekcyjną postacią robaków pasożytniczych są jaja. Są one bardzo odporne na działanie czynników zewnętrznych oraz trudno je wyeliminować ze ścieków przez chlorowanie.

Bakterie chorobotwórcze występujące w wodzie

Testy do szybkiego wykrywania bakterii z grupy coli i Escherichia coli w wodzie- Readycoult Coliform

Testy do szybkiego wykrywania bakterii grupy coli i E.coli oraz enterokoków w wodzie- Readycoult Coliform i Readycoult Enterococci

Testy do szybkiego wykrywania enterokoków w wodzie - Readycoult Enterococci

Alternatywne metody wykrywania wskaźników bezpieczeństwa żywności

Tecra Unique Salmonella, Tecra Unique Listeria, Tecra Unique Staphylococcal Enterotoxin-testy służą do szybkiego wykrywania patogenów in vitro.

API Listeria, API 20E (do wykrywania pałeczek z rodziny Enterobacteriaceae, m.in. Salmonellasp.)

Vidas- testy Vidas służą do wykrywania antygenów na zasadzie immunoenzymatycznej z ostatecznnym odczytem fluorescencyjnym, przeprowadzonym przy użyciu immunoanalizatora VIDAS

PCR-technika PCR polega na selektywnym powielaniu (amplifikaji) fragmentów DNA w warunkach in vitro.

POWIETRZE

Drobnoustroje występujące w powietrzu

Gleba i woda- podstawowe naturalne środowiska bytowania drobnoustrojów

Powietrze- środowisko wtórne, drobnoustroje nie namnażają się w nim, przebywają przejściowo

Mikroflora powietrza

Oznaczanie stopnia skażenia powietrza

Analiza powietrza prowadzona jest w oparciu o obecność tzw. wskaźników bakteriologicznego zanieczyszczenia powietrza.

Są to gatunki lub rodzaje wytypowane jako przedstawiciele mikroflory pochodzącej z określonych zanieczyszczeń- gleby, wód powierzchniowych, od ludzi i zwierząt.

Wskaźniki bakteriologicznego zanieczyszczenia powietrza:

Poznanie mikroflory powietrza umożliwia:

Najczęściej spotykana mikroflora powietrza to ziarniaki:

oraz

Bakterie chorobotwórcze tj. Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, a także paciorkowce z rodzaju Enterococcus i Streptococcus przedostają soę do powietrza z jamy nosowo- gardłowej, zakażonych ran czy bielizny szpitalnej

Ilość mikroflory powietrza jest zmienny i zależy od wielu czynników

W zakładach przemysłowych stopień zanieczyszczenia powietrza zależy od:

Zasadniczo wyróżnia się dwie grupy metod pobierania prób oparte na

  1. osiadaniu zawiesin drobnoustrojów

  2. filtracji powietrza przez filtry

Metoda sedymentacyjna Kocha

L=Ax100x100/Pxk

Gdzie

L- ilość drobnoustrojów (jtk/m3)

A- średnia ilość kolonii na płytkach Petriego

P- powierzchnia płytki(cm2)

k- współczynnik zależny od czasu ekspozycji k=1 dla 5 minut, k=2 dla 10 min

k=3 dla 15 min

Metody zderzeniowe

Wyróżniamy w nich 2 sposoby przepuszczania powietrza tzn wirowanie powietrza wciąganego przez przyrząd ( mikroorganizmy osadzają się na cylindrze) lub zderzanie strumienia zasysanego powietrza z pożywką

W metodzie zderzeniowej stosuje się wymuszone osiadanie drobnoustrojów na powierzchni podłoża hodowlanego za pomocą aparatu, który zasysa określoną objętość powietrza .

Pozwala to na dokładne przeliczenie drobnoustrojów przypadających na określoną objętość powietrza

Polegają na przepuszecniu określonej objętości powietrza przez odpowiedni jałowy filtr. Po przefiltrowaniu powietrza wypłukuje się zatrzymane drobnoustroje ze stałego materiału filtracyjnego znaną objętością cieczy, która następnie posiewa się na pożywki stałe.

Powietrze- wymagania mikrobiologiczne

Pomieszczenia produkcyjne przemysłu spożywczego

Sale wykładowe i sale ćwiczeń

Liczba bakterii tlenowych

500-600 jtk/m3

Nie więcej niż 2000 jtk/m3

Liczba grzybów

0-50 jtk/m3

Nie więcej niż 2000 jtk/m3

Dezynfekcja i wyjaławianie powietrza może być prowadzona następującymi metodami

CZYSTOŚĆ POWIERZCHNI

Badanie czystości powierzchni metodą szablonową

Jeżeli powierzchnia była wcześniej dezynfekowana, do płynu płuczącego należy dodać roztwór neutralizatora

Liczba bakterii tlenowych

N3=NxFxD/ A

gdzie

N- liczba jtk w 1cm3 rozcieńczalnika (płynu płuczącego)

F- ilość rozcieńczalnika w cm 3

A- badana powierzchnia w cm2

D- odwrotność stosowanego w posiewach rozcieńczenia

Badanie czystości powierzchni metodą wymazów z powierzchni nie ograniczonej szablonem

Wykonanie

Liczba bakterii tlenowych

Nrw = NxFxD, gdzie

N- liczba kolonii z posiewu 1cm3 płynu płuczącego

F-objętość płynu płuczącego

D- odwrotność stosowanego w posiewach rozcieńczenia

Badanie czystości powierzchni z zastosowaniem płytek kontaktowych (Count-Tact)

Wykonanie

Badanie czystości powierzchni z zastosowaniem barwnych pasków testowych HY-RISE

CZYSTOŚĆ OPAKOWAŃ

y = 100-B/Ax 100%

Metoda popłuczyn

(naczynia myte do 10-2, a nie myte do 10-4).

Rodzaj użytego do hodowli podłoża zależy od opakowania

W prawidłowo umytych opakowaniach nie powinno być więcej niż 10 komórek na 1 cm2 .

Metoda bezpośrednia (Richtera)

Metoda tamponowa

CZYSTOŚĆ MIKROBIOLOGICZNA RĄK PRACOWNIKÓW

Skład ilościowy i jakościowy mikroorganizmów zanieczyszczających rece zależy głównie od:

Oznaczenia:

Wymagania

Liczba bakterii tlenowych mezofilnych

Obecność gronkowców koagulazododatnich

Obecność rodziny Enterobacteriaceae lub pałeczek gr coli

Stopień czystości rąk

poniżej 100

Nb

nb

Ręce czyste

100-1000

nb

nb

Ręce dostatecznie czyste

Powyżej 1000

nb

nb

Ręce brudne

GLEBA

Charakterystyka mikroorganizmów glebowych

Wirusy

Bakterie

Grzyby

Podział mikroflory glebowej ze względu na pochodzenie

Mikroflora autochtoniczna

Mikroflora zymogeniczna

Spośród bakterii szczególnie neibezpieczne dla człowieka są

Liczba drobnoustrojów występujących w glebie zależy od

Ocena jakości gleby za pomocą analizy mikrobiologicznej

Analizę gleby stosuje się do oceny

Zakres analizy mikrobiologicznej gleby pod względem sanitarnym powienien obejmować:



Wyszukiwarka

Podobne podstrony:
Wykłady z mikrobiologii
Wykłady z mikrobiologii, Weterynaria rok 2, Mikrobiologia
wyklady mikra, Wykład 7 mikrobiologia 2006, Wykład 7 mikrobiologia 2006-11-14
Konspekt wykładu 3, mikrobiologia
http wyklady mikrob, AM, rozne, mikrobiologia, Mikrobiologia, mikroby
wyklady mikra, Wykład 8 mikrobiologia 2006, Wykład 8 mikrobiologia 2006-11-21
Podsumowanie wykładów z Mikrobiologii, ZOOTECHNIKA, Mikrobiologia
wykłady, Mikrobiologia ogólna
mikro wyklady, Mikrobiologia z mikologią
Wykład mikrobiologia 06
wykład z mikrobiologii 09.04.2010, Mikrobiologia
ostatnia storna z wykładu 3 mikrobiologia 20 10 2009
0 SUPLEMENT Wykłady Mikrobiologia WWL 2011 2012
Wykłady z mikrobiologii, higienistka stomatologiczna
wykłady, Mikrobiologia W-d 7
wykłady, Mikrobiologia Informacje ogólne, w-d 1
wykłady, Mikrobiologia W-d 11

więcej podobnych podstron