img044

aktywność emulgacyjna bakterii prowadzących proces biodegradacji

3.    Drobnoustroje, odczynniki.

Biodegradacja prowadzona jest z użyciem szczepu G-21.

Substrat- olej napędowy (Koncern Orlen) dodany został do podłoża mineralnego w ilości 6% wagowych. Źródło azotu w tym podłożu stanowi chlorek amonu.

4.    Oznaczenia.    ' - -    *

4a. Pomiar biomasy.

Pomiar biomasy wykonuje się metodą wagową. W tym celu zawiesinę hodowlaną poddaje się wirowaniu (wirówka Backman 18000 obr/min. T=4°C, czas=20 min.). Zlewa się płyn pohodowlany a do osadu biomasy dodaje 10 ml mieszaniny aceton-heksan (3:1). Całość poddaje się sączeniu na filtrze bibułowym. Pozostałą na sączku biomasę suszy się do stałej masy.

4b. Oznaczenie stopnia wykorzystania węglowodorów

Zawartość węglowodorów ogółem w próbach po dwutygodniowej hodowli szacuje się metodą wagową. Z powierzchni płynu pohodowlanego po wirowaniu (patrz pkt.4a) zbiera się warstwę nie zużytych w hodowli węglowodorów do wcześniej zważonej probówki. Masa zebranej fazy organicznej dostarczy danych na temat stopnia biodegradacji oleju napędowego w badanych próbach.

Chromatografia gazowa zostanie wykorzystana do oceny stopnia biodegradacji heksadekanu. 4c. Oznaczenie aktywności emulgacyjnej użytego szczepu bakteryjnego

Zasada oznaczenia aktywności emulgacyjnej drobnoustrojów polega na określeniu zmian absorbancji w mieszaninie płynu po hodowli (pozbawionego biomasy) w obecności substratu węglowodorowego.

Skład mieszaniny reakcyjnej jest następujący:

-    3 ml płynu pohodowlanego pozbawionego biomasy

-    0,5 ml 0,05M buforu Tris-HCl o pH- 7,2

-    0,25 ml IM MgSC>4

0,1 ml oleju napędowego 0,3 ml wody destylowanej

Całość poddaje się wytrząsaniu w ciągu 1 godziny w temperaturze 30°C na wytrząsarce (ilość obrotów 200/ min, amplituda 4,5 cm). Uzyskany w tym czasie stopień zemulgowania węglowodorów oznacza się na drodze pomiaru zmętnienia zawiesiny przy długości fali A,=540 nm. Odczytu dokonuje się po 5 minutach od momentu umieszczenia płynu w kuwecie. Próbę odniesienia stanowi woda destylowana.

5.    Opracowanie wyników