0 8

ł. wrxwvr.xni    ^\fihixó\ ć»ćvu moieiN c/.tv\ Tjtowaibżic w tmlatiŁ TMfc.

ż.el wzorzec wielkości (np. DNA faga ż trawionego enzymem //int/III). Po elektroforezie sfotografować w przechodzącym świetle UV obraz otrzymanego rozdziału.

3.    Denaturacja DNA w żelu. Zastosować denat urację zasadową poprzez umieszczenie żelu w 300 ml odczynnika 6 na czas nie dłuższy niż I godz.

4.    Neutralizacja żelu. Po denaturacji DNA żel przemyć krótko wodą, a następnie zanurzyć w dużej ilości roztworu do neutralizacji (odcz. 7) na 1,5 godziny.

5.    Suszenie żelu. Zneutralizowany żel poddać odwodnieniu w suszarce podciśnieniowej (w temp. 55*0 przez 2 godz.). Po wysuszeniu żel powinien przybrać postać cienkiej, elastycznej błony.

6.    Hybrydyzacja z sondą molekularną. Wysuszony żel zanurzyć w mieszaninie hybrydyzacyjnej (objętość mieszaniny = powierzchnia żelu x 0,3 ml) (odcz. 8). Prehy-

1    2    3    4    W

Rys. 10.17. Schemat wyniku analizy rcaranżacji genów immunoglobulinowych po trawieniu genomowego DNA restryktazą fihaI i hybrydyzacji metoda Southerna z. zastosowaniem wyznakowanej radioizotopo-wo sondy molekularnej J„. Ścieżki na żelu elektroforetycznym odpowiadają: I genomowemu DNA trawionemu Hhal i wybarwionemu bromkiem etydyny; 2 — DNA z tkanki nielimfoidalnej po hybrydyzacji /. sondą J„ (widoczny prążek rcaranżacyjny dla komórek linii zarodkowej); 3 DNA z poliklonalncj populacji limfocytów B po hybrydyzacji z sondą J_u (widoczny prążek gcrminalny i „smużenie", będące efektem różnorodnych rcaranżacji w poszczególnych komórkach B); 4 — DNA ze złośliwego rozrostu B-komórkowcgo (widoczny pojedynczy prążek rcaranżacji monoklonalnejl. W — wzorzec długości fragmentów DNA (RNA)

458