img142 3

4.    Oznaczenie miana heterotroficznych bakterii denitryfikacyjnych:

-    oznaczenie wykonać, dokonując posiewu próbek rozcieńczonych w zakresie od 10^-1 do 10~⁷ na pożywkę wg Giltay’a, inkubację prowadzić w temp. 26°C w ciągu 7 dni;

-    po okresie inkubacji wykonać obserwacje wzrostu bakterii. O obecności bakterii denitryfikacyjnych świadczą zmętnienie pożywki oraz obecność gazu w rurkach Durhama. Wynik oznaczenia podać jako NPL lub miano bakterii denitryfikacyjnych;

-    z hodowli o reakcji dodatniej wykonać preparaty trwałe i zabarwić metodą Grama.

5.    Oznaczenie liczby bakterii asymilujących azot (Azotobacter sp.):

-    wykonać posiew próbek wody rozcieńczonych w zakresie od 10^-1 do 10~⁵ do pożywki Fiodorowa, inkubację prowadzić w temp. 26°C w ciągu 7 dni;

-    po okresie inkubacji wykonać obserwacje wzrostu kremowobiałych, dużych kolonii bakterii;

-    wykonać obserwacje mikroskopowe charakterystycznych dużych komórek z otoczką śluzową w preparatach, zabarwionych metodą prostą. Do zabarwienia komórek użyć błękitu metylenowego lub fuksyny fenolowej;

-    z hodowli o reakcji dodatniej wykonać preparaty trwałe i zabarwić metodą Grama.

6.    Oznaczanie miana Clostridium pasteurianum wiążących azot atmosferyczny w warunkach beztlenowych:

-    wykonać posiew próbek rozcieńczonych w zakresie od 10^_1 do 10~⁵ na pożywkę Winogradskiego, inkubację prowadzić w temp. 26°C w ciągu 7 dni;

-    wykonać obserwacje wzrostu bakterii. O obecności Clostridium pasteurianum świadczą zmętnienie pożywki, zapach kwasu masłowego oraz obecność gazu w rurkach Durhama. Wynik oznaczenia podać jako NPL lub miano bakterii Clostridium pasteurianum;

-    z hodowli o reakcji dodatniej wykonać preparaty trwałe i zabarwić metodą Grama.

7.    Obserwacje mikroskopowe bakterii symbiotycznych z brodawek roślin

motylkowych:

-    z rozgniecionej na opalonym szkiełku przedmiotowym brodawki korzeniowej przenieść sterylną ezą kulturę bakteryjną do kropli płynu fizjologicznego, przygotować preparat barwiony fuksyną zasadową i wykonać obserwację mikroskopową.

66