img209

-    rozpuścić podłoże agarowe zwykłe, schłodzić do temp. ok. 45°C, zalać płytki z badanym materiałem, pozostawić do zastygnięcia;

-    odwrócić płytki dnem do góry i inkubować w temp. 28°C przez 48 h;

-    odczyt wyników: policzyć wyrosłe kolonie, uwzględniając rozcieńczenie, podać wynik w 1 g gleby.

Wyniki można również podać w 1 g s.m. gleby. W tym celu trzeba przygotować 10 g naważkę gleby i suszyć ją w temp. 105°C, aż do uzyskania stałej wagi. Na podstawie uzyskanej w ten sposób wartości i liczby komórek, otrzymaną metodą płytek lanych, przeliczyć wynik na 1 g s.m. gleby.

4.    Oznaczanie liczebności bakterii termofilnych:

-    analizę wykonać zgodnie z metodyką opisaną przy oznaczaniu liczebności bakterii saprofitycznych, z tą różnicą, że inkubację należy przeprowadzić w temp. 60°C przez 24 h.

5.    Oznaczanie miana bakterii grupy coli metodą fermentacyjną probówkową:

-    wykonać posiew w trzech równoległych powtórzeniach, wprowadzając po 1 cm³ roztworu glebowego z kolejnych przygotowanych wcześniej rozcieńczeń do probówek z pożywką Eijkmana;

-    inkubować w temp. 37°C przez 48 h;

-    odczyt wyników: podać miano, czyli największe rozcieńczenie, w którym stwierdzono wzrost bakterii. Za wynik dodatni przyjmuje się zmianę barwy na żółtą oraz obecność gazu w probówce Durhama.

6.    Oznaczanie miana bakterii grupy coli typu kałowego metodą fermentacyjną probówkową:

-    analizę wykonać zgodnie z metodyką opisaną przy oznaczaniu miana bakterii z grupy coli, z tą różnicą, że inkubację należy przeprowadzić w temp. 44,5°C przez 24 h.

7.    Wykonanie rozcieńczeń do oznaczenia bakterii przetrwalnikujących:

-    z gleby wykonać naważkę 10 g, przenieść ją do kolby Erlenmeyera z 90 cm³ płynu fizjologicznego i wytrząsać ją na wytrząsarce przez 15 min. Następnie pozostawić na ok. 5 min do sedymentacji;

-    kolbę z roztworem glebowym ogrzewać w łaźni wodnej w temp. 80°C przez 15 min, w celu wyeliminowania mikroflory nieprzetrwalniku-jącej;

-    tak przygotowany roztwór glebowy jest rozcieńczeniem 10^-1. Z niego należy wykonać kolejne rozcieńczenia (10~², 10^-3 itd.) według schematu (rys. 11.3).

8.    Oznaczenie liczebności bakterii przetrwalnikujących:

-    z kolejnych przygotowanych rozcieńczeń wykonać posiew metodą płytek tartych (0,1 cm³ zawiesiny glebowej) w trzech powtórzeniach (rozdz. 9);

-    inkubować w temp. 28°C przez 48 h;

-    odczyt wyników: policzyć wyrosłe kolonie, uwzględniając rozcieńczenie próby i ilość wysianego materiału, wynik podać w 1 g gleby.

134