img247

Przed posiewem pożywkę Wrzoska zregenerować, gotując przez 10 min w łaźni wodnej, a następnie schłodzić w bieżącej wodzie do temp. 20°C. Świeżo przygotowana pożywka nie wymaga zabiegu regeneracji;

-jedną z dwóch probówek, będącą powtórzeniem dla każdego rozcieńczenia, pasteryzować w łaźni wodnej o temp. 80°C przez 10 min, a następnie schłodzić do temp. 20°C;

-    posiewy inkubować w temp. 37°C przez 48 h, gdy wynik jest ujemny, inkubować przez dalsze 24 h;

-    po inkubacji, z probówek, w których wynik był dodatni (zmętnienie pożywki i obecność gazu), wykonać preparat mikroskopowy barwiony metodą Grama (rozdz. 3);

-z probówek z pożywką Wrzoska, w których stwierdzono obecność Gram-dodatnich, a w starszych hodowlach - Gram-ujemnych laseczek, pobrać pipetą materiał z dna probówki i przenieść (2-3 krople) do płytki Petriego;

-    rozpuścić podłoże Wilsona-Blaira, schłodzić do temp. ok. 45°C, zalać płytki z badanym materiałem, po zastygnięciu zalać grubą warstwą agaru wodnego i pozostawić do zestalenia;

-    inkubować w pozycji denkiem do dołu w temp. 37°C przez 48 h;

-    odczyt wyników - o obecności bakterii beztlenowych redukujących siarczyny świadczy zaczernienie całej pożywki lub wokół kolonii. Wyniki odczytać po 24 i 48 h, podając obecność lub brak tych bakterii w badanej masie próbki (np. 1 g lub 0,01 g).

4. Oznaczanie ogólnej liczby grzybów:

-    wykonać posiew metodą płytek lanych (rozdz. 9) po 1 cm³ zawiesiny z kolejnych, uprzednio przygotowanych, rozcieńczeń do dwóch równoległych płytek;

-    rozpuścić podłoże Sabouraud, schłodzić do temp. ok. 45°C, zalać płytki z badanym materiałem, pozostawić do zestalenia;

-    odwrócić płytki dnem do góry i inkubować w temp. 25°C przez 5-7 dni;

-    odczyt wyników - po inkubacji policzyć wyrosłe kolonie, uwzględniając rozcieńczenie, podać wynik w 1 g paszy. W razie trudności z rozróżnieniem sporadycznie występujących kolonii bakterii od kolonii grzybów, a zwłaszcza drożdży, należy przeprowadzić badanie mikroskopowe. Badanie to jest wymagane również przy oddzielnym liczeniu pleśni i drożdży;

-    na odtłuszczone szkiełko przedmiotowe nanieść kroplę płynu fizjologicznego i wprowadzić do niej oczkiem ezy materiał pobrany z kolonii. Kroplę przykryć szkiełkiem nakrywkowym i oglądać pod mikroskopem, uwzględniając obecność komórek bakterii, drożdży i strzępek pleśni.

172