karoten1

r

Ćwiczenie 2

Oznaczenie P-karotenu w materiale roślinnym Ekstrakcja P-karotenu

Na wadze analitycznej odważyć od 2,400 do 2,500 materiału roślinnego, który następnie należy przenieść ilościowo do porcelanowego moździerza (w razie trudności użyć bibuły, którą należy dołączyć do próbki), dodać piasku i dokładnie rozetrzeć.

Odmierzyć cylindrem miarowym 15 cm³ mieszaniny acetonu i eteru naftowego, dolać do moździerza nadal rozcierając.

Dokładnie roztartą mieszaninę przenieść ilościowo na lejek Shotta G-3, spłukując moździerz eterem naftowym. Sączenie można prowadzić pod próżnią pompki wodnej.

P-karoten z osadu należy wymywać mieszaniną aceton: eter naftowy 3:97 do momentu, aż spływające krople nie staną się bezbarwne.

Przesącz przelać do rozdzielacza (o pojemności 250 cm³) i przemyć 40 cm³ wody destylowanej. Do osobnych zlewek: zlać dolną warstwę acetonowo-wodną oraz górną eterową. Z warstwy acetonowo-wodnej należy wyekstrahować resztę P- karotenu dwoma porcjami po 15 cm³ eteru naftowego. Połączone ekstrakty eterowe przelać do butelki zdoszlifowanym korkiem i suszyć bezwodnym siarczanem (VI) sodu (10 g) przez 10 minut. Wysuszony ekstrakt przesączyć przez lejek z karbowany sączkiem bibułowym do okrągłodennej kolby ze szlifem na 250 cm^J. Sączek należy przepłukać niewielką ilością eteru naftowego. Na próżniowej wyparce rotacyjnej zagęścić roztwór do objętości około 3 cm³.

Tak przygotowany ekstrakt chromatografować.

Chromatograficzne oddzielenie p-karotenu

Kolumnę chromatograficzną przygotowujemy w następujący sposób. Przy pomocy drutu lub bagietki szklanej wprowadzić na dno kolumny mały zwitek waty. Wsypać porcjami absorbent ubijając bagietką ze stopką do wysokości 15 cm. Dobre wymieszanie absorbentu i równomierne jego ubicie warunkuje równe ułożenie i wymywanie pasm. Na wierzch warstw nałożyć warstwę 1 cm bezwodnego siarczanu (VI) sodu. Zwilżyć kolumnę za pomocą 25-50

1