3

3/ 2 M HCł

4/ 0.1MHCI Wykonanie

Do probówek pipetujemy 0,25ml 2% RNA, 0,5 ml odpowiedniego bufoni. Tak przygotowane próby umieszczamy w łaźni i po 5min dodajemy 0,25 ml zawiesiny enzymu. (Przygotować i wykonać próby z wszystkimi przygotowanymi buforami). Inkubujcmy przez godzinę. Po inkubacji próby umieścić w lodzie i dodać do każdej z nich po 0.37 ml silnie oziębionego 2M HC1. Zamieszać i postawić na 30min w łaźni z lodem. Odwirować. Następnie pobrać 100 pl supematantu i dodać do 5m! 100 mM HC1. Pomiar absorbancji uzyskanych prób wykonać przy 260nm. Próbę „kontrolną" stanowić będzie mieszanina wszystkich składników reakcji nic inkubowana w 37°C.

Aktywność enzymu wyrażamy w jednostkach enzymatycznych. Jednostką aktywności w tej analizie jest przyrost absorbancji próby równy 0,01 jednostki. Zmiana absorbancji dotyczy produktu reakcji (polinukleolydów i nuklcotydów), który rozpuszcza się w kwasach.

Jeśli starczy czasu próby z buforem fosforanowym ogrzewamy przez 5 min. w temperaturze 50; 70; i 100°C i natychmiast oziębiamy a następnie oznaczamy ich aktywność katalityczną.

Uzyskane wyniki zebrać i przedstawić w tabeli oraz opatrzyć stosownym komentarzem