DSC00155 (24)

Wykonanie

Do 6 probówek odmierzyć po około 1 cm³: do 1 - glicyny, do 2 -cysteiny, do 3 - proliny, do 4 - roztworu białka, do 5 - żelatyny, a do 6 - roztworu badanego. Następnie do każdej probówki dodać po około 1 cm³ roztworu ninhydryny i ogrzewać przez 1 minutę we wrzącej łaźni wodnej. Obserwować zabarwienie.

1.2. Reakacja biuretowa

Reakcja służy do identyfikacji wiązania peptydowego. Jest pozytywna już dla tripeptydów, nie dają jej aminokwsy i dipeptydy. Białka tworzą kompleksy z miedzią, natomiast aminokwasy,z miedzią wytwarzają kompleksy chelatowe.

Produkty reakcji peptydów z siarczanem miedzi w środowisku zasadowym dają barwę różową, białka - fioletowoczerwoną lub fioletowo-niebieską, a aminokwasy-jasnoniebieską.

11    ł I

C-0    0    CH—/?,

I \ / I ⁵

—CH    .Cu.    C—0~

! U II

-N

-OOC-HĆ'

ł

R

Wykonanie

Do 4 probówek odmierzyć po około 1 cm³: do 1 - glicyny, do 2 -roztworu białka jaja, do 3 - żelatyny, do 4 - roztworu badanego. Do każdej probówki dodać po 2 cm³_20% NaOH i po 1 kropli 0,5 cm³ roztworu CuS0₄. Obserwować zabarwienie.

1.3. Reakcja z fluorodinitrobenzenem (FDNB)

Odczynnik Sangera, czyli 1-fluoro-2,4—dinitrobenzen (FDNB), łączy się w środowisku zasadowym z grupą a- aminową aminokwasów, peptydów i białek. W wyniku reakcji otrzymujemy pochodne aminokwasów (DNP-aminokwasy).

Rozdziału DNP-aminokwasów można dokonać chromatograficznie. Reakcja ta służy również do oznaczania N-końcowych aminokwasów w białkach.

Wykonanie

Do 4 probówek odmierzyć po 1cm³: do 1- glicyny, do 2 - białka jaja kurzego, do 3 - żelatyny, do 4 - roztworu badanego. Następnie zawartość probówek zalkalizować do pH 84-9. Kontrolę pH przeprowadzić papierkiem wskaźnikowym. Do każdej probówki dodać po 0,2 cm³ fluorodinitrobenzenu, zamieszać i wstawić na 10 minut do łaźni o temperaturze 40°C. Obserwować zabarwienie.

R H

DNP - aminokwas

H-C-NH₂ * F-COOH

2. Reakcje charakterystyczne aminokwasów

2.1. Reakcje aminokwasów aromatycznych V

2.7.7. Keakcja ksantoproteinowa

Aminokwasy z pierścieniem aromatycznym wolne, jak i związane w białkach, ogrzewane ze stężonym kwasem azotowym, dają żółte zabarwienie, a po alkalizacji - pomarańczowe. W tej reakcji nitrowaniu ulega tyrozyna i tryptofan. Nitrowanie fenyloalaniny zachodzi pod wpływem mieszaniny nitrującej (HN0₃+ H₂S0₄).

HOOC-CH-ChL\ ~    HOOC—CH—C    NO,

l AA _____S i I    - ____

NH,

Xl

OH

NO,

* 2HN0₃-- /l/u

OH

•2H,0

tyrozyna

żółto zabarwiona pochodna nitrowa tyrozyny

149