CCF20140201038

i

TEMAT: ANALIZA MIKROBIOLOGICZNA ŻYWNOŚCI

a)    Poziom ogólnej liczby drobnoustrojów saprofitycznych.

b)    Stan sanitarny żywności - szczepy wskaźnikowe.

c)    Obecność bakterii chorobotwórczych.

1.    Analizę mikrobiologiczna poprzedza:

-    pobranie próby i opis cech zewnętrznych oraz organoleptycznych (zapach);

•    przygotowanie próby do analizy mikrobiologicznej - rozdrobnienie;

•    ocena mikroflory na podstawie preparatu mikroskopowego;

2.    Pobieranie prób żywności

•    próba reprezentatywna dla całej partii badanego materiału;

-    próba średnia;

-    próba pobrana w warunkach aseptycznych do jałowego naczynia;

-    masa próby: lOg lub lOcm¹^;

-    odpowiednia forma transportu do laboratorium badawczego;

-    sprawdzenie stanu i szczelności opakowania, dane produktu;

-    wygląd, zapach, konsystencja;

3.    Przygotowanie próby do analizy

-    rozcieńczenie lub rozdrobnienie;

•    płyn fizjologiczny, 0.1% woda peptonowa, 2% r-r cytrynianu sodu;

•    warunki aseptyczne;

4.    Ocena stanu mikrobiologicznego w preparacie mikroskopowym

-    preparaty odciskowe barwione;

-    ilość mikroorganizmów żywych i martwych;

5.    Oznaczanie ogólnej liczny drobnoustrojów saprofitycznych

■ metoda posiewów na płytki z podłożem;

-    badanie prze trwa Iników -10 min ogrzewanie w 80*C;

-    oznaczanie drożdży i pleśni - pożywki sterylne;

-    2 powtórzenia z każdego rozcieńczenia;

-    temp. Inkubacji: 20*C, 25*C, 55*C;

6.    Oznaczanie bakterii grup coli

-    selektywne i różnicujące pożywki hodowlane zawierające laktozę:

fioletu

- podłoże BLB - żółć i zieleń brylantowa lub siarczan sodowo-laurylowy (dodatek krystalicznego, który hamuje wzrost G(+));

c

-    podłoże Eijkmana - Indykatory pH (purpura bromokrezolowa);

-    potwierdzenie obecności bakterii pochodzenia kałowego:

-    posiew do pożywki BIB (żółć i zieleń brylantowa + laktoza), inkubacja 24-48h w temp. 44*C (met. fermentacyjno-probówkowa);

-    posiew do wody peptonowej, inkubacja 24-48h dla stwierdzenia zdolności bakterii do wytworzenia indolu z tryptofanu (potwierdzenie: metoda Kovacsa);

7.    Oznaczanie gronkowców chorobotwórczych Staphylococcus aureus

-    pożywka selektywna Baird-Parkera; telluryn potasu - lecytyna żółtka jaja kurzego; 24-28h w temp. 37*C;

-    aktywność katalazy - hodowla na agarze odżywczym, 37*C, 18-14h + 3% H202;

-    aktywność koagulazy - inkubacja hodowli bulionowej z roztworem liofilizowanej plazmy krwi królika;

■    cząstki lateksu powleczonego przeciwciałami otrzymanymi z surowicy krwi królika immunizowanego toksyna - enterotoksyna-antygen; OXOID;

8.    Wykrywanie beztlenowych laseczek przetrwalnikujących redukujących siarczany (IV)

•    szok termiczny (10 min w temp. 80*C);

-    hodowla w warunkach beztlenowych w namnażającej, nieselektywnej pożywce Wrzoska (zmętnienie, pęcherzyki gazu);

•    barwienie Grama • laseczki G(+);

■    wykluczanie względnych beztlenowców - hodowla na podłożu stałym w warunkach tlenowych;

-    podłoże Wilson-Blaira - siarczan sodu (IV), związki żelaza (Fe 3+);

9.    Clostridium perfringens

-    TSC-agar (Tryptose Sulphite Cycloserine) - podłoże tryptozowo-siarczynowe z cykloseryna; tryptoza, pepton sojowy, ekstrakt drożdżowy, pirosiarczan sodu, cytrynian żelazowo amonowy, ekstrakt oltka, cykloseryna;

-    Clostridium botulinum - badania na zwierzętach;

10.    Wykrywanie bakterii rodzaju Salmonella

-    przednamnażanie - próbka (25g lub 25cm^A3) + 225cm^A3 zbuforowana woda peptonowa; inkubacja 37*C, 16-20h;

•    namnażanie selektywne - 10cm^A3 hodowli + pożywka z kwaśnym selenianem sodowym oraz cystyna; inkubacja 37*C, 18-24h; lcm^A3 hodowli + pożywka Rapport-Vasiliadis; inkubacja 42*C, 18-24h;

-    posiew na pożywki stale różnicujące - składniki selektywne (np. zieleń brylantowa, sole kwasów żółciowych), laktoza, barwniki ( czerwień fenolowa, błękit bromotymolowy); inkubacji 37*C, 24-48h;

-    identyfikacja - selekcja 5 charakterystycznych kolonii z każdej płytki, posiew na agar odżywczy, inkubacja 37*C, 24-48h;

badania biochemiczne i serologiczne;

6