HPLC 4

I

Chemiczna analiza instrumentalna - ćwiczenia [MSZ]

Objętość fazy ruchomej Vo (objętość martwa) nie przyczynia się w sposób bezpośredni do rozdziału i zależy od wymiarów kolumny i wypełnienia. Pewien udział w objętości fazy ruchomej mają też injektory, detektory i łączniki. Stąd poszczególne udziały można określić jako tzw. udziały kolumnowe i efekty pozakolumnowe.

Podstawowe równanie retencji dla chromatografii podziałowej przy pominięciu nieliniowości oraz efektów powodujących poszerzenie pasm, ma postać:

j^VR = \

= Vo + KV_s

gdzie: V_R-objętość retencji,

Vo - objętość fazy ruchomej,

V_s- objętość fazy stacjonarnej,

K - równowagowy współczynnik podziału.

Ogólna zasada rozdziału

Zrozumienie pojęcia „ rozdzielanie” w chromatografii wymaga przede wszystkim ilościowego określenia stopnia rozdzielenia za pomocą zdolności rozdzielczej Rg. Tak jak wcześniej wspomniano rozdzielenie substancji na kolumnie następuje na skutek ich zróżnicowanych prędkości migracji. To czy dana faza stacjonarna (lub rozpuszczalnik) może spowodować rozdzielenie substancji, zależy od termodynamicznych własności układu. Sprawność rozpuszczalnika można wyrazić ilościowo, posługując się retencją względną a zwaną także współczynnikiem selektywności łub współczynnikiem rozdzielania:

tp? — t.

_    2 i -^2 _ *R2

K,

^lRI ^{— t}c

4