HPLC 6

Chemiczna analiza instrumentalna - ćwiczenia [MSZ]

Rozdzielczość R$, można wyrazić za pomocą współczynnika retencji (k), współczynnika selektywności (a) i liczby półek teoretycznych (N). Zależność tę opisuje poniższe równanie, przy czym indeks 2 dotyczy składnika dłużej zatrzymanego na kolumnie.

Rs = V* (a-l/o) (kz/l+k₂) (N₂)^1/2

CEL ĆWICZENIA

Celem ćwiczenia jest ilościowe oznaczenie kwasu foliowego.

WYKONANIE ĆWICZENIA

1. Odważyć na wadze analitycznej odpowiednią ilość wodorotlenku sodu (NaOH) i sporządzić jego roztwór o stężeniu 0.01 M w kolbie miarowej używając wody dejonizowanej.

2. Odważyć na wadze analitycznej 5 mg kwasu foliowego i rozpuścić w 5 ml sporządzonego wcześniej roztworu 0,01 M NaOH w kolbce miarowej.

3. W celu przygotowania krzywej kalibracyjnej rozcieńczyć wzorzec kwasu foliowego o stężeniu lmg/ml tak aby otrzymać stężenia podane przez prowadzącego ćwiczenia.

4. Wykonać analizę chromatograficzną roztworów wzorcowych i próbki o nieznanym stężeniu.

5. Każdy z nastrzyków wykonać trzykrotnie.

6. Wykreślić krzywą kalibracyjną odkładając na osi rzędnych pole powierzchni pod pikiem a na osi odciętych stężenie kwasu foliowego.

7. Wyznaczyć stężenie kwasu foliowego w roztworze o nieznanym stężeniu.

8. Przygotować sprawozdanie z ćwiczenia zgodnie z zaleceniami prowadzącego.

Warunki analizy:

1. Eluenty: bufor fosforanowy, acetonitryl,

2. Przepływ: lml/min,

3. Temperatura: pokojowa,

4. Kolumna: RP-18,

5. Detektor: UV-Vis,

6. Długość fali: 290 nm. r