wymaganiaG bmp

- 248

gdzie

/u. 14+/

^ * *Łat *i

Scaloną stałą K^ nazywa się stałą Hiehaallsa.

Dla większoóoi reakoji enzymatycznych k₁ > kj^. Drży spełnieniu tego warunku Kg « Jigl » K₀- Wyprowadzając równanie ' /II.1+3/ zastosowano powyższe przybliżenie, które po raz pierwszy było przyjęte przez Biggaa i Holdana. Ody [s] P K_gl wtedy enzym praktycznie całkowicie będzie związany z aubstratom. Przy [S) P K_m mianownik równania /U. 1+3/ w przybliżeniu równa się [S]    1 otrzymujemy:

/n. 1*5/

W ³kkat[^BJ,

Prze2 r_maZ oznaczono maksymalną szybkość reakcji enzymatycznej* Szybkość ta nie zalety od stężenia subetratu, oo oznacza,że dodanie większej ilośoi substratu do roztworu nie spowoduje wzrostu szybkości reakcji. Zgodnie z równaniem /II.145/, szybkość maksymalna zalety od i całkowitego stężenia enzymu. Dla S ^ mamy kolejny graniczny wzór na szybkość reakcji*

/n. 146/

fckatWo [SJ

W tym przypadku reakcja będzie pierwszego rzędu względem sub-atratiu Interesujący jest także warunek [s] <= E^, dla którego

r

*k.t.r*J

-2—■

2

/II.1+7/"

Przy spełnieniu tego warunku szybkość reakcji ladzie równa połowie szybkości maksymalnej• Stałe k^_at i K_m są ważnymi kinetycznymi parametrami charakterystycznymi dla reakcji enzymatycznych* Określają one podatność eubstruta na działanie enzymu. Klaka wartość stałej i wysoka wartość k_J|:at oznaczają; że reakcja enzymatyczna zachodzi bardzo szybko. Taki substrat nazywa się specyficznym wobec danego enzymu, ponieważ jeet on wiązany z enzymem trwałym wiązaniem 1 reaguje bardzo szybko.

Po wyodrębnieniu nowego enzymu, dalszy etap badań polega na określeniu jego specyficzności^ Sprowadza się do wyznaczenia wartości stałych    dla danego eubstratu. W tym celu

zwykle bada się szybkość reakcji w okresie początkowym* tzn. do około 5% stopnia przemiany substratu* W tych warunkach szybkość reakcji nie zmienia się w czasie, ponieważ stężenie substratu jest praktycznie stałe.

Parametry równań kinetycznych wyznacza się sporządzając wykres w układzie współrzędnych zgodnych z równaniem;

1

fsl

/II.143/

¹    1    Km

^rl ^kat^jo ^kkat^^B^o

Ha rysunku 36 przedstawiono wyniki w tym układzie współrzędnych.

Równanie odwrotności -i- nosi nazwę zależności hiueweara-Bur-^ri

ka. Wyznaczona na podstawie tych danych wartość K wynosi

0,017 mol/dm³.

Dla prostych enzymów hydroli tyczny ch _t takich jak np. ehymo-trypsyna i acetylocholinaza, oraz dla enzymów współdziałają-cyoh z ko^riicymami, stężenie enzymów oznacza się przez Ich