3. Śledziona jest wyjmowana (w warunkach sterylnych) i populacja splenocytów zawierająca aktywowane limfocyty B poddaje się fuzji z linią szpiczaka zmutowanych myszy parz mieszanie komórek w medium zawierającym FBS w obecności czynników indukujących fuzję (glikol polietylenowy PEG) w celu uzyskania komórek hybrydowych zwanych hybrydomami,
/•Zmutowane myszy stanowiące źródło linii szpiczaka nie mają enzymu transferazy fosfory boży lo hypoksantyna: guanina (HGPRT') niezbędnej w drodze „z odzysku" uzyskiwania deoksynukleotydów dla syntezy DNA,