skanuj0013

Przygotowanie pH-metru i pomiar pH:

pH-metr jest potencjometrem mierzącym przy pomocy specyficznych elektrod siłę elektromotoryczną (e.m.f.). Do pomiaru stosujemy dwie elektrody: a/ szklaną wrażliwą na zmiany stężenia jonów H⁺ b/ oraz kalomelową stanowiącą elektrodę odniesienia.

Uwaga! bańka elektrody szklanej jest bardzo cienka i łatwo ulega uszkodzeniom. Nowe typy elektrod do pomiaru pH posiadają obie elektrody w jednej obudowie i stanowią zespoloną elektrodę kalomelowo-szklaną.

Elektrody przed użyciem płuczemy wodą destylowaną, osuszamy skrawkami bibuły i umieszczamy w badanym roztworze. Roztwór podczas pomiaru powinien być mieszany z udziałem mieszadła elektromagnetycznego.

Przed każdym pomiarem pH-metr kalibrujemy przy pomocy roztworów o znanym pH. Roztwory standardowe dobieramy tak, aby ich pH było zbliżone do pH przygotowywanego buforu. Powszechnie używanym roztworem standardowym jest 50mM roztwór ftalanu potasu, który w temperaturze 25°C ma pH = 4,01 a w 37°C — 4,02.

Uwaga! pH zmienia się wraz z temperaturą, więc roztwory używane do sporządzania buforów, jak również standardy muszą mieć ustabilizowaną (pokojową) temperaturę. Nowoczesne pH-metry posiadają funkcję korekcji temperatury.

Jeśli pH analizowanego buforu odbiega od zaplanowanego, dodajemy do mieszanego roztworu niewielkie ilości roztworów kwasu lub soli. Zawsze po osiągnięciu planowanego pH bufor mieszamy przez kilka minut i ponownie sprawdzamy wartość pH.

Bufory, których składnikiem jest TRIS, sprawdzamy ponownie następnego dnia.

Pomiar i korekcja pH uzyskanych roztworów buforowych:

Przygotuj pH-metr jak wyżej. Na podstawie mieszadła magnetycznego umieść 50 ml zlewkę, na dnie której ostrożnie połóż mieszadełko. Wlej do zlewki wyliczoną objętość octanu sodu a następnie kwasu octowego. Sprawdź pH uzyskanego roztworu. W tym celu włącz mieszadło i precyzyjnie (tak aby mieszadełko nie zniszczyło elektrody) umieść w roztworze bańkę elektrody zespolonej kalomelowo-szklanej. Wykonaj pomiar. Jeśli wynik pomiaru różni się od żądanego, dodaj ostrożnie (małymi kroplami!), ciągle mieszając, roztwór 0,5 M kwasu lub soli. Po uzyskaniu właściwego pH, mieszaj jeszcze przez 3-5 min. Sprawdź ponownie pH. Jeśli jest właściwe, wyjmij elektrodę, opłucz ją i umieść w buforze wzorcowym.

II. Wyznaczanie optimum pH dla fosfatazy kwaśnej bulw ziemniaka.

Fosfatazy to enzymy należące do klasy hydrolaz oznaczonych numerem EC 3. Fosfatazy kwaśne należą do pod-podklasy hydrolaz monoestrów fosforanowych oznaczonych numerem EC 3.I.3.2. Enzymy te hydrolizują w pH niższym od 7,0 wiązanie estrowe pomiędzy resztą fosforanową a związkami organicznymi (białkami, cukrami, lipidami itp.) według równania: