img030 (36)

się często dopiero po przekroczeń i u stężenia 407 Met.Hb. Zgcr. spowodowany niedotlenieniem może nastąpić przy stężeń o przekraczającym 70/ MetHb.

■    ■ owe: ozinajczajn ■ e: hemoglce i

(metodą s^jiąnmothie>^^

Zasada oznaczeń i a

W obecności utleniacza K₃Fe(CN)₅ oraz KCN hemoglobina przechodzi w cyjanmethemog1obinę mającą charakterystyczne pasmo absorbancji w okolicach 540 nm. Kalibracja metody jest utrudniona przez fakt, że brak dostępnych handlowo preparatów hemoglobiny. W laboratoriach naukowych dokonuje się kalibracji w oparciu o zawartość Fe heminy._ Dla celów praktycznych można korzystać z dostępnych w handlu wzorcowych roztworów CNMetHb, 1 jo ze współczynnika kalibracji wykonanego w warunkach standardowych ( kiuwety 1cm, dł. fali dokładnie 540 nm ). Milimolowu współczynnik absorbancji przy tej długości fali ma wartość 44,0.

Odczynnik Drabkina

W kolbie miarowej o pojemności 1000 cm“ rozpuścić 0,305 g K₃Fe(CN)₃, 1 g NaHC0₃, 0,05 g KCN (trucizna!) i uzupełnić wodą

do 1000 cm³.

Wykonan i e oznaczeń i a

Odmierzyć 5 cm³ odczynnika Drabkina ( biuretą lub pipetą automatyczną ), a następnie 0,02 cm³ krwi, przepłukując mikropipe-tę odczynnikiem. Wykonać równoległe oznaczenie z roztworem hemoglobiny o znanym stężeniu. Po 15 min. odczytać absorbancję przy długości fali 540 nm wobec odczynnika Drabkina. Można również użyć gotowy wzorzec cyjanmethemog1obiny.

Ob 1 i czan i e wun i ków

c wzorca

A próby badanej Hb w g/100 cm³ = -^;-

A wzorca