75308 skanuj0007

Stosowanie odpowiednich sztucznych akceptorów lub donorów elektronów wraz z odpowiednimi inhibitorami transportu elektronów pozwala na niezależne badanie aktywności obydwu fotosyste-mów. Sztucznym akceptorem elektronów z PS U może być żelazicyjanek potasu (K3[Fe(CN)6]), który jest redukowany do żelazocyjanku (K43|Fe(CN)6]). Wartość potencjału oksydacyjno-redukcyjnego tej pary redoks określa zaznaczone na schemacie miejsce pobierania elektronów przez K₃[Fe(CN)₆]).

WYKONANIE

Odczynniki:

A,    Wykrywanie aktywności katalazy, peroksydazy, oksydazy polifenolowej i oksydazy cytochromowej

-    3% roztwór H2O2,

-    roztwór KCN, UWAGA! KCN jest silną trucizną !

-    roztwór benzydyny w kwasie octowym,

-    odczynnik NADI (przygotować bezpośrednio przed użyciem, mieszając p-fenyleno-dwuaminę z a-naftolem w stosunku 1: 1 (1 ml + 1 ml)(

-    0,1M bufor fosforanowy o pH 7,4.

-    bufor fosforanowy o pH 7,4,

-    roztwór pirokatechiny

Ekstrakt z ziemniaka. Umyty i obrany ziemniak utrzeć na tarce. Miazgę włożyć do woreczka z gazy i zanurzyć w zlewce zawierającej około 200 ml wody, a następnie lekko wycisnąć zawartość. Roztwór łagodnie wymieszać. Po opadnięciu skrobi na dno zlewki, płyn ostrożnie zlać znad osadu. Uzyskujemy w ten sposób wodny ekstrakt enzymu. Część nadsączu (około 50 ml) przelać do zlewki i zagotować, a następnie zdenaturowany termicznie ekstrakt ostudzić wkładając zlewkę do zimnej wody.

B,    Izolowanie chloroplastów i oznaczanie aktywności fotochemicznej fotosystemu II

-    0.3 M sacharoza w 50 mM buforze (K) fosforanowym, pH 7.4

-    6 mM K_:1[Fe(CN)6] w wodzie

-    0.2 M sacharoza w 50 mM buforze (K) fosforanowym, pH 7.4 zawierającym 10 mM KC1 -10% (w/v) TCA

Liście sałaty pozostawione przed ćwiczeniem na 24 godz. w ciemności

6