90

Część B. Badanie enzymów

Rozdział VI. Właściwości kinetyczne vć    enzymów

Ćwiczenie 14.

Wyznaczanie stałej Michaeiisa-Menfsn i oznaczanie aktywności enzymów^1,1

Cel ćwiczenia

Ćwiczenie umożliwia poznanie kinetyki enzymów (stałej K_m i wpływu stężenia enzymu

na szybkość reakcji) na przykładzie dwóch enzymów z różnych klas — hydrolazy i oksydore-duktazy.

Wprowadzenie

Kinetyka reakcji enzymatycznych. Dościowe badanie i interpretaqa wyników szybkości reakcji enzymatycznych wchodzi w zakres kinetyki procesów. Obejmuje ona badanie wpływu stężenia substratu, stężenia enzymu, tempera tury^pH oraz mechanizmu reakcji ka ta 1 izo w a -nvch_pizez enzymy. Enzymy katalizują reakcje metaboliczne w organizmach żywych (in yiyo),4ecz mogą również działać poza komórką {in vitro), co ma podstawowe znaczenie w badaniu ilościowym oraz właściwości enzymów.

Charakterystyczną cechą reakcji enzymatycznych jest zjawisko wysycania enzymu sub-stratem (rys. 20). Obserwacje tego zjawiska doprowadziły Michaelisa i Menten do sformułowania teorii działania enzymów i ich kinetyki. Zgodnie z tą teorią enzym £ tworzy z substratem S kompleks enzym-substrat ES, który następnie rozpada się na: produkt P i wolny enzym E według równania:

£+5

£ + £

£S V

/

ziółek.

79