DSC07133 (2)

odróżnienia komórek żywych od martwych, stwierdzenia obecności substancji zapasowych, w badaniu przepuszczalności błony cytoplazmatycznej, stosuje się barwienie przyżyciowe. Polega ono na wprowadzeniu do żywych komórek nietoksycznego barwnika o dużej kontrastowości. Używa się barwników w dużym rozcieńczeniu. Stwierdzono, że bakterie w ten sposób zabarwione przestają się rozmnażać, stąd żadna z tych metod nie jest w zasadzie barwieniem przyżyciowym.

PIERŚCIEŃ

WAZELINOWY

| o i

ODWRÓCEŃ I BN,

—ffc i ■_

PRZYCIŚNIĘCIE

ODWRÓCENIE

Rjc. 26. Sporządzanie preparatu w kropli wiszącej

Do przygotowania preparatu barwionego na „żywo”, na szkiełku przedmiotowym, obok kropli zawiesiny drobnoustrojów umieszcza się kroplę barwnika. Obie krople miesza się ezą, przykrywa szkiełkiem nakrywkowym i po upływie określonego czasu ogląda pod mikroskopem.

PREPARATY UTRWALONE

Obserwację bakterii pod mikroskopem prowadzi się najczęściej w preparatach utrwalonych i barwionych.

TECHNIKA SPORZĄDZANIA PREPARATU UTRWALONEGO

Imiotowe odtłuścić.

Przed sporządzeniem preparatu należy szkiełko przi

przeciągając parokrotnie nad płomieniem palnika gai owego. Na dobrze odtłuszczonym szkiełku kropla wody powinna się swobodn e rozlewać.

szkiełko nanosi się zawiesinę, którą v^ego i pozostawia do powinien być cienki, e lub chemicznie, drobnoustrojów do zmyciem w czasie limożliwiąją wnikanie

ss

Sporządzenie rozmazu (ryc. 27). Na odtłuszczone kroplę hodowli lub badanego materiału i sporządzfa rozprowadza się ezą na powierzchni szkiełka przedmioto wyschnięcia na wolnym powietrzu. Po wysuszeniu rozmaz ledwo widoczny. Wysuszony preparat utrwala się termiczif Utrwalanie ma na celu przytwierdzenie komórek powierzchni szkiełka przedmiotowego i chroni je przeć barwienia. Ponadto, zabite w trakcie utrwalania komórki barwnika do ich wnętrza, co ułatwia barwienie.

Utrwalanie termiczne polega na kilkakrotnym p zesunięciu szkiełka przedmiotowego z rozmazem nad płomieniem palnika pd spodu preparatu, przerywając, kiedy szkiełko zacznie lekko parzyć.

Utrwalanie chemiczne stosuje się przy badaniu strukti r komórkowych. Do utrwalania chemicznego używa się związków odwadn ających takich, jak alkohol etylowy, metylowy, mieszanina alkoholu i eteru w stosunku 1:1, 10-procentowy roztwór formaliny, sublimat itp. Utrwalanie chemiczne polega na zalaniu wysuszonego rozmazu na określony czas utrwalaczem. Następnie utrwalacz się zlewa i preparat suszy na powietrzu. Używając formaliny łub sublimatu, należy preparat dobrze przemyć wodą i wysuszyć.