fizjologia stosowana2

Cezary Watala_

krwi rejestrowanym przy użyciu cytometrii przepływowej rejestrujemy zazwyczaj zmiany dotyczące następujących antygenów powierzchniowych płytek:

■    antygen CD62 (odpowiadający P-selektynie, która jest receptorem sekwencji oligosacharydowej na powierzchni neutrofilów i monocy-tów) - jego ekspresja (frakcja komórek antygenopozytywnych) wzrasta w następstwie aktywacji płytek oraz zmniejsza się podczas hamowania aktywacji płytek;

■    antygen CD42b (opowiadający podjednostce a glikoproteiny Ib, która razem z glikoproteinami GPV i GPEX tworzy receptor dla czynnika von Willebrand’a) - jego ekspresja (frakcja komórek antygenopozytywnych) maleje w następstwie aktywacji płytek oraz wzrasta podczas hamowania aktywacji płytek;

■    antygen CD61 (odpowiadający glikoproteinie GPIIIa, która jest podjednostką receptora dla fibrynogenu) - ilość kopii tego antygenu (a tym samym natężenie fluorescencji przeciwciał związanych przez ten antygen na powierzchni płytek) wzrasta w następstwie aktywacji płytek oraz zmniejsza się podczas hamowania aktywacji płytek.

Wykonanie ćwiczenia

1.    Załaduj program WinMDI.exe do opracowywania danych z cytometru przepływowego FACScan.

2.    Wczytaj zbiory plt_spoc.dat jako wykres punktowy (Dotplot) oraz wyświetl populację mierzonych obiektów (komórek) w układach FSC vs. FL1 oraz FSC w. FL2. Ustal wartości progowe świecenia niespecyficznego dla fikoerytryny (kanał FL2).

3.    Wczytaj zbiór plt_spoc.dat (płytki we krwi pełnej utrwalonej natychmiast po wynaczynieniu) jako histogram oraz wyświetl wartości fluorescencji w kanałach FL1 oraz FL2. Ustal znaczniki (markery) świecenia niespecyficznego dla fikoerytryny (kanał FL2).

4.    Wczytaj zbiory:

plt_thr.dat (płytki we krwi pełnej inkubowanej z trombiną), plt_trap.dat (płytki we krwi pełnej inkubowanej z peptydem aktywują-cym receptor dla trombiny) i plt_adp.dat (płytki we krwi pełnej inkubowanej z ADP), pit_60.dat (płytki izolowane inkubowane 60 min w temp.

_K pokojowej),

plt_mg.dat (płytki izolowane inkubowane z jonami Mg* ), pit_pro.dat (płytki izolowane inkubowane z prokainą),