fizjologia stosowana7

Temat: 6

Dynamiczna analiza płytek krwi przeprowadzona metodą cytometrii przepływowej

Cezary Walała

Samodzielna Pracownia Zaburzeń Krzepnięcia Krwi Katedry Diagnostyki

Laboratoryjnej

Cytometria przepływowa jest nowoczesną metodą służącą do określania liczebności subpopulacji komórek. Metoda ta służyć może do określania różnych cech morfologicznych i fizjologicznych badanych obiektów. Zasada działania cytometru przepływowego jest podobna do działania mikroskopu fluorescencyjnego wyposażonego w układ spektrofotometryczny i system ilościowej analizy danych. Urządzenie to umożliwia pomiar fluorescencji oraz cech morfologicznych obiektów z prędkością ok. 100 komórek/sek, co pozwala osiągnąć wysoką dokładność i zminimalizować rozrzut wyników. Zasadą działania cytometru przepływowego jest ugięcie i rozproszenie światła laserowego na przepływających obiektach (komórkach) oraz pomiar fluorescencji pochodzącej od odczynników reagujących z badanymi obiektami w komórkach {przeciwciał znakowanych znacznikami fluorescencyjnymi). Komórki rozpraszają światło lasera, które jednocześnie wzbudza fluorescencję znaczników fluorescencyjnych, którymi wyznakowane są przeciwciała rozpoznające antygeny powierzchniowe na błonie komórek. Źródłem światła w cytometrach przepływowych są z reguły lasery argonowe (emitujące światło o długości 488 nm), kryptonowe lub helowo-neonowe, stosuje się także wysokociśnieniowe lampy rtęciowe. Dodatkowym wyposażeniem cytometru może być sorter komórkowy działający w oparciu o ładowanie elektrostatyczne i odchylanie w polu elektromagnetycznym lub rozdzielający zawiesinę komórkową na frakcje w zależności od natężenia fluorescencji. Przy użyciu cytometrii jazepływowej można m.in. rejestrować:

- cechy morfometryczne (wielkość) badanych obiektów na podstawie ugięcia światła na brzegach komórek (Forward Scatter, FSC),

- cechy morfologiczne struktur wewnątrzkomórkowych (ziarnistość) na podstawie rozproszenia światła na organellach wewnątrzkomórkowych i Monie komórkowej (Side Scatter, SSC),

- ekspresję i zagęszczenie rozmieszczenia receptorów błon komórkowych

{fluorescencja w odpowiednich kanałach);

- zachodzenie procesów cytofizjologicznych (fagocytoza, pinocytoza)',

- ploidię komórek i zawartość kwasów nukleinowych.