fizjologia stosowana5

_Dynamiczna ciiictlIza płytek krwi..,.    _

/ histogramów dla FSC, SSC, FL1 oraz FL2 odczytąj parametry statystyczne rozkładu obiektów w obrębie ustalonych regionów. Zarejestruj wartości miar położenia {średnia geometryczna I mediana) oraz miar rozproszeniu {współczynnik zmienności), jak również stopień ekspresji badanego antygenu powierzchniowego dla płytek we krwi poddawanej iub niepoddawonej warunkom krążenia poza* ustrojowego.

6. Przedyskutuj uzyskane wyniki, starając się odpowiedzieć na następujące pytania:

a.    na które szlaki aktywacji płytek mogą wpływać warunki krążenia pozaustrojowego?

b.    jak warunki krążenia pozaustrojowego wpływają na niszczenie płytek krwi?

c.    który z mierzonych parametrów obrazuje proces rozpadu i niszczenia płytek?

d.    jak można zinterpretować i wyjaśnić ochronną rolę aprotyniny na aktywację płytek krwi w warunkach krążenia pozaustrojowego?

Ćwiczenie 3. Ocena nasilenia trombopoezy na podstawie określania frakcji płytek mRNA-pozytywnych

Założeniu i cel ćwiczenia

Cytomctria przepływowa znajduje coraz szersze zastosowanie w ocenie ilości młodych płytek krwi, które, podobnie jak retikulocyty, zawierają resztkowe ilości cytoplazmatycznego RNA, i nazywane są, per analogiom, płytkami retikulocytarnymi. Frakcję płytek retikulocytarnych można określać na podstawie fluorescencji komórek wyznakowanych oranżem tiazolowym po uprzednim wybramkowaniu płytek przeciwciałami anty-CD61-PE, anty-CD41-RPE lub anty-CD42b-RPE. Metoda ta pozwala wnioskować o szybkości oddzielania się młodych płytek od megakariocytów oraz o zachodzeniu trombopoezy. Średnie wartości fizjologiczne frakcji płytek retikulocytarnych u osób zdrowych kształtują się w zakresie 7-12%, co pozostaje w zgodzie z teoretyczna wartością 10%, przy założeniu, że średni czas życia płytki krwi wynosi 10 dni, oraz zważywszy, że większość resztkowego cytoplazmatycznego RNA ulega degradacji w ciągu 24 godzin. Ćwiczenie to pozwoli zobrazować:

■    przydatność metody cytometrii przepływowej w ocenie nasilenia trombopoezy i szybkości powstawania młodych płytek;

■    barwliwość płytek zawierających resztkowy RNA w cytoplazmie przy użyciu metod cytometrycznych;

■    możliwość oceny średniego czasu długości życia płytek we krwi pełnej;

M wpływ niektórych chorób na nasilenie procesu trombopoezy oraz

zmiany średniego czasu długości życia płytek krwi.