Metody molekularne w Genetyczna diagnostyka
diagnostyce molekularna
Diagnostyka oparta na
hybrydyzacji Southerna
1
Analiza RFLP
DNA
2 3
1 4
Gen normalny
2 3
4
1
Gen zmutowany
2
DNA
Hybrydyzacja z sondami
2 3
1 4 allelospecyficznymi (ASO)
Gen normalny
2+3
4
2
Gen zmutowany
ACGTAGTCATGGCTGACTGAACTG
ACGTAGTCATGGCTGACTGAACTG Tm=48 C
Tm=48 C
Tm=40 C
Tm=40 C
ACGTAGTCATGGCTGACTGAACTG
ACGTAGTCATGGCTGACTGAACTG
ACGTAGACAGAGCTGACTGAACTG
ACGTAGACAGAGCTGACTGAACTG
Tm=40 C
Tm=48 C
Tm=40 C
Tm=48 C
ACGTAGACAGAGCTGACTGAACTG
ACGTAGACAGAGCTGACTGAACTG
3
Zastosowanie PCR w
diagnostyce genetycznej
1 2 1+2 Normalny gen 1 2 1+2
Normalny gen
1
Produkt PCR
1
Produkt PCR
HaeIII
Gen z delecja
Gen z mutacja
HaeIII
2
Produkt PCR
2 Produkt PCR
HaeIII
HaeIII
+ +
4
TaqI HinP1
HaeIII
PCR w diagnostyce
mikrobiologicznej
5
SQ SEQUENCE 1684 BP; 326 A; 543 C; 521 G; 294 T; 0 OTHER;
GTCGACACGC CTTCTGCACG GGAAGTCCTT CTGCGGCCAT CGTTGCTATG GCCGCTTACT 60
GCCTTCTAGT CCGTGCGGCT CTCGCAACAG CTCACGGGAC CTTTTTGAGG ATCGCCACTT 120

CAGGTCTTCA ACTCGCGGAT GCCCTCATTG GCAACGTTTG CGCCCTGCCT TGGGGCGGCC 180
GGCAGCCACC AAGTCGAGCA CTTTGCGGCG GAACTACTCG GGGTAACACT TCGGCACGGA 240
CACGGCTCGT TCGACGGACG TCGTGACCAG AAGTCGAGCA AACCGACTCC ACTCTAGCTA 300
GTGATACAAG CTTTTTTGTA GCCGCGCGAT GAACCGCCCC GGCATGTCCG GAGACTCCAG 360
TTCTTGGAAA GGATGGGGTC ATGTCAGGTG GTTCATCGAG GAGGTACCCG CCGGAGCTGC 420
GTGAGCGGGC GGTGCGGATG GTCGCAGAGA TCCGCGGTCA GCACGATTCG GAGTGGGCAG 480
CGATCAGTGA GGTCGCCCGT CTACTTGGTG TTGGCTGCGC GGAGACGGTG CGTAAGTGGG 540
TGCGCCAGGC GCAGGTCGAT GCCGGCGCAC GGCCCGGGAC CACGACCGAA GAATCCGCTG 600
AGCTGAAGCG CTTAGCGGCG GGACAACGCC GAATTGCGAA GGGCGAACGC GATTTTAAAG 660
ACCGCGTCGG CTTTCTTCGC GGCCGAGCTC GACCGGCCAG CACGCTAATT AACGGTTCAT 720

CGCCGATCAT CAGGGCCACC GCGAGGGCCC CGATGGTTTG CGGTGGGGTG TCGAGTCGAT 780
CTGCACACAG CTGACCGAGC TGGGTGTGCC GATCGCCCCA TCGACCTACT ACGACCACAT 840
CAACCGGGAG CCCAGCCGCC GCGAGCTGCG CGATGGCGAA CTCAAGGAGC ACATCAGCCG 900

CGTCCACGCC GCCAACTACG GTGTTTACGG TGCCCGCAAA GTGTGGCTAA CCCTGAACCG 960
TGAGGGCATC GAGGTGGCCA GATGCACCGT CGAACGGCTG ATGACCAAAC TCGGCCTGTC 1020
CGGGACCACC CGCGGCAAAG CCCGCAGGAC CACGATCGCT GATCCGGCCA CAGCCCGTCC 1080
CGCCGATCTC GTCCAGCGCC GCTTCGGACC ACCAGCACCT AACCGGCTGT GGGTAGCAGA 1140 DNA drobnoustroju
CCTCACCTAT GTGTCGACCT GGGCAGGGTT CGCCTACGTG GCCTTTGTCA CCGACGCCTA 1200
CGCTCGCAGG ATCCTGGGCT GGCGGGTCGC TTCCACGATG GCCACCTCCA TGGTCCTCGA 1260
CGCGATCGAG CAAGCCATCT GGACCCGCCA ACAAGAAGGC GTACTCGACC TGAAAGACGT 1320
TATCCACCAT ACGGATAGGG GATCTCAGTA CACATCGATC CGGTTCAGCG AGCGGCTCGC 1380
CGAGGCAGGC ATCCAACCGT CGGTCGGAGC GGTCGGAAGC TCCTATGACA ATGCACTAGC 1440
1

Produkt PCR
CGAGACGATC AACGGCCTAT ACAAGACCGA GCTGATCAAA CCCGGCAAGC CCTGGCGGTC 1500
CATCGAGGAT GTCGAGTTGG CCACCGCGCG CTGGGTCGAC TGGTTCAACC ATCGCCGCCT 1560
CTACCAGTAC TGCGGCGACG TCCCGCCGGT CGAACTCGAG GCTGCCTACT ACGCTCAACG 1620
CCAGAGACCA GCCGCCGGCT GAGGTCTCAG ATCAGAGAGT CTCCGGACTC ACCGGGGCGG 1680
TTCA 1684
//
+
" Wirusy:
 pryszczyca
 białaczka drobiu
 białaczka bydła
Przykłady wykrywania
 pomór świń
drobnoustrojów techniką PCR
 choroba Aujeszky
 zakaz
ne zapalenie gardła i krtani ptaków
 wścieklizna
 maedi-visna
6
" Bakterie: " Inne organizmy:
 Brucella abortus  Mycoplasma sp.
 Escherichia coli  Toxoplasma sp.
 Leptospira sp.
 Mycobacterium tuberculosis
 Salmonella sp.
 Mycobacterium pseudotuberculosis
" Zastosowanie techniki PCR i innych technik
Podsumowanie
molekularnych pozwala na znaczne
skrócenie czasu potrzebnego do wykrycia
" Diagnostyka molekularna jest niezwykle
obecności drobnoustrojów i określenia ich
przydatnym narzędziem pozwalającym w
rodzaju.
sposób szybki i pewny wykrywać obecność
" Drobnoustroje wykrywa się szybciej niż
mutacji w DNA oraz obecność czynników
wytwarzanie przeciwko nim przeciwciał.
zakaz
nych w organizmie.
" Można zastosować uniwersalne
wyposażenie przydatne do wykrywania
różnych rodzajów drobnoustrojów.
7