13021

ANALIZA MIKROBIOLOGICZNA

Analiza Jakościowa - próba określenia jakie drobnoustroje występują w danym materiale (próbce natury), np. w

próbce wody. gleby, powietrza, moczu

Analiza ilościowa - polega na stwierdzeniu ile drobnoustrojów występuje w określonej jednostce badanej natury ciecz: lml gaz: lm³ ciało stałe: lg

Okreśfanfe liczby bakterii

- metody analizy ilościowej:

bezpośrednie - liczenie kom. bakteryjnych w zwykłym preparacie barwionym lub np. komorze Burkera pośrednie - mierzenie parametru, który zostaje przeliczony na ilość kom. bakteryjnych (np. u komórek bakteryjnych charakteryzujących się specyficznym mechanizmem - parametrem jest miara przyrostu stężenia produkowanego związku)

Próba reduktazo wa

-> o liczebności bakterii wnioskuje się na podstawie aktywności enzymów

-> określa się liczbę bakterii obecnych w surowym mleku

•    bakterie obecne w mleku są względnie beztlenowe (nie potrzebują tlenu, ale mogą się rozwijać w warunkach tlenowych)

•    podczas ich rozwoju następuje silne wypieranie tlenu z mleka - w mleku następuje zmiana z właściwości utleniających na redukujące

•    im więcej bakterii, tym silniej działają reduktazy i zwiększają się właściwości redukujące mleka

•    do mleka dodaje się błękitu metylenowego, który redukcje się poprzez uwodornienie i traci swą barwę -forma leukobazalna (odbarwiona)

> 5 h 0.5 mln/ml 2-5 h -> 0.5-4 mln/ml 20min - 2h -> 4-20 mln/ml >20min -> 20 mln/ml

Nefelometrla (metoda fotometryczna)

-» o liczebności bakterii wnioskuje się na podstawie zmętnienia bulionu

-> zawieszone w badanym płynie bakterie rozpraszają i pochłaniają część promieni słonecznych przepuszczanych przez badany płyn = efekt zmętnienia

Cytometria przepływowa

-» łączy ze sobą cechy metod pośrednich i bezpośrednich

-¥ pojedyncze komórki bakterii przechodzą przez cienką kapilarę, którą na końcu oświetla światło lasera

-> detektor liczy ile zaszło przecięć (rozproszeń) światła

Metoda płytkowa Koch [a

-¥ metody płytkowe i metoda rozcieńczeń nadają się do oznaczania ilości bakterii w danym środowisku

•    znając rozcieńczenie i ilość płynu użytego do wysiewu, można obliczyć liczbę wyrosłych kolonii, a co za tym idzie można również obliczyć ilość drobnoustrojów na jednostkę objętości lub masy badanego materiału

—> liczbie komórek bakterii wnioskije się na podstawie liczby kolonii, które rozwijają się na stałym podłożu mikrobiologicznym (włókno agarowe - wysuszona, sprasowana plecha krasnorostów z gat. Agar. które jest używane do zestalania podłoża)

-> zakłada się. że jedna kolonia rozwija się z jednej komórki bakteryjnej (ilość komórek » ilość kolonii)

•    założenie to nie zawsze jest spełnione, gdyż podczas namnażania występuje konkurencja różnych gatunków bakterii, których populacje spotykają się (zbyt dużo materiału powoduje, że nie wszystkie komórki mogą rozmnożyć się w kolonie)

• podczas tej metody można dodatkowo przeprowadzić test na obecność Escherlcha coli (jako pożywkę używa się bulion z dodatkiem laktozy, w każdym rozcieńczeniu imieszcza się odwrócone do góry dnem rurki Durchana

•    Eschericha coli rozkłada laktozę z wydzieleniem C0₂. który gromadzi się w rurkach

•    miano coli = miara czystości wody z punktu widzenia przydatności do celów spożywczych (najmniejsza objętość danego płynu w którym notuje się jeszcze obecność bakterii); miano coli dla Polski wynosi 100 - im wyższy współczynnik miana, tym woda jest czyściejsza

•    Escherica coli występuje w dwóch odmianach: tryb feralny, tryb ziemny - woda nadająca się do celów pitnych, nie może zawierać trybu feralnego