15056

2. Izolacja DNA z warzyw, owoców metodą uproszczoną Wykonanie:

Pomidor (zgnieść) lub jabłko (zetrzeć na tarce) a następnie umieścić w zlewce i dodać łyżeczkę płynu do mycia naczyń w celu emulgacji lipidów, a przez to dezintegracji błon cytoplazmatycznych. Zlewkę wraz ze zhomogeiuzowanym materiałem wstawić na 15 minut do łaźni wodnej (60°C) (uwaga!!! temperatura me może być zbyt wysoka, bowiem DNA może zdenaturować. z kolei nie może też być za chłodno, bo wtedy nie zdenaturuje RNA co sprawi, że izolowany DNA może być nim zanieczyszczony). Przełożyć do łaźni lodowej (szybko schłodzić) i dodać łyżkę stołową soli zmiękczającej do mięsa firmy Kamis (na tym etapie chodzi o wytrącenie białek, które podobnie jak DNA rozpuszczają się w wodzie). Otrzymany ekstrakt przesączyć pizez lejek z sączkiem bibułowym. Wlać przesącz do naczynia (cylindra) zawierającego 50 cm¹ alkoholu 96% (może być denaturat). Zaobserwować wytrącone białe „klaczki” DNA.

1

Spektrofotometryczne oznaczanie zawartości kwasów nukleinowych i badanie ich

czystości

Zasada:

Aromatyczne pierścienie purynowe i pirymidynowe absorbują światło w zakresie UV. Właściwość tę można zastosować do pomiaru stężenia RNA w roztworze. Wprawdzie poszczególne zasady różnią się nieco pod względem zakresem maksymalnej absorpcji UV, to jednak różnice te są niewielkie i można przyjąć, że 260 nm jest optymalną długością fali przy pomiarze ilościowym RNA.