101900

mutanty >mi wyKuu^c* wzrostu idsntyfikujs w* na pożywkscn wzbogaconych tytko o jadsn skiadn.k

mlnmilna Trp

t .amina n.acyna

I

mutant ma

uszkodzony szlak syntazy alaniny

	6	obserwufto wzrost mutantów na pożywkach aolektywnych można ooonió inkioj substancji potrzebują on* bo wzrostu • zklentyf kować uszkodzony g«n

1.    Wychodzimy od jakiegoś szczepu ->

2.    Działanie czynnikiem mutagennym na makrokonidia

3.    Krzyżowanie ponownie ze szczepem dzikim, ale o przeciwnym typie płciowym ->

4.    Otrzymujemy worki

5.    1 worek pod mikroskop ->

6.    Rozcinanie igłą preparacyjną i pobieranie po 1 zarodnika (askospoty) z worka ->

7.    Pojedyncze zarodniki przesiewamy na pożywkę kompletną ->

8.    Przesiewamy spory na pożywkę minimalną

a.    Jeżeli spory rosną na pożywce minimalnej to nie interesujące (bo mają nieistotną mutację lub bez mutacji)

b.    Jeśli nie rosną, to oznacza że mają mutację, która powoduje zaburzenia w szlaku metabolicznym, np. brak syntezy jakiegoś AA lub zasady nukleotydowe. W tym przypaku wykonujemy kolejne punkty ■)

9.    Przesiew na pożywkę minimalną + na pożywkę z jakimś aminokwasem np. alaniną,

Jeśli na minimalnej nie rośnie, a na pożywce z dodatkiem alaniny rośnie, to zaburzony szlak syntezy alaniny.