71219

7. Po inkubacji komórki wirowaliśmy przez 10 sekund (6500 obr./min.). Zlaliśmy ostrożnie nadsącz, osad komórek rozpuściliśmy w lOOpl pożywki LB (z ampicyliną). Delikatnie wymieszaliśmy.

8. Porcję 15 pl i 85 pl hodowli posialiśmy na płytki z pożywką LB (z ampicyliną, X-gal i IPTG) inkubowaliśmy kolonie przez noc w 37»C (odwrócone dnem do góry)

9. Pobraliśmy pojedyncze kolonie i wysialiśmy na indywidualne lOml kultury LB/ampicylina

lO.Inkubowaliśmy kultury przez noc a osad komórek wykorzystaliśmy do uzyskania pożądanych konstuktów plazmidów (miniprep).

Pożywka LB (Luria Broth):

Agar		0,5%		Ig
Bacto-Tryptone		10 g		2g
Ekstrakt drożdżowy		5g		Ig
Nad		5g		Ig
woda dest	do	1000 ml		200 ml
IPTG stock	0,1M	do pożywki dodać 40		ul/ ptytkę
X-gal stock	2%	do pożywki dodać lOOul / ptytkę

ampicylina lOOmg/ml stężenie końcowe w pożywce 50 ug/ml