6830718945

Laboratorium biochemii

Amfoteryczny charakter białek i aminokwasów (ćw. I)

1.    Cel ćwiczenia

% s

Wykonanie krzywych miareczkowania kwasu glutaminowego i glicyny,

Określenie punktów izoelektrycznych, pK grup funkcyjnych i przedziałów buforowania tych aminokwasów,

•S Wyznaczenie punktu izoelektrycznego kazeiny.

2.    Odczynniki

✓    lMNaOH

✓    1MHCI

S Wodny roztwór 0.1M glicyny

■S Wodny roztwór 0.05M kwasu glutaminowego

S IM kwas octowy

•S 0.1 M CHsCOONa zawierający kazeinę w końcowym stężeniu 0.2%

S Bufory wzorcowe do kalibracji pehametru o pH 4.01,7.01,9.18

3.    Szkło i aparatura

S Probówki chemiczne na 20 ml i na 5 ml •S Pipety automatyczne oraz tipsy Pipety szklane S Cylinder miarowy S Zlewki o pojemności SOml S Mieszadło magnetyczne ■S Mieszadełka magnetyczne małe i duż e S Pehametr laboratoryjny z elektrodą

4.    Wykonanie ćwiczenia

1. Wyznaczanie punktu izoelektrycznego kazeiny

a)    Wyka libro wano pehametr za pomocą buforów wzorcowych o pH 4.01, 7.01, 9.18, każdorazowo płucząc elektrodę wodą destylowaną,

b)    Przygotowano 18 suchych probówek chemicznych oraz stoper,

c)    W 9 ponumerowanych probówkach dużych przygotowano serię rozcieńczeń kwasu octowego wg schematu:

1    probówka: 13.6 ml HzOdest + 6.4ml IM CH3COOH

2    probówka:    S.Oml HzOdest + S.Oml próbki 1

3    probówka :    5.0ml HzOdest + S.Oml próbki 2

(■■0

9 probówka:    S.Oml HzOdest + 5.0ml próbki 8

d)    W pierwszej i ostatniej probówce wyrównano objętość do S ml,

e)    Do 9 kolejnych małych probówek chemicznych odmierzono po 3ml przygotowanych rozcieńczeń kwasu octowego

f)    Zmierzono pH każdego z roztworów, umieszczając elektrodę bezpośrednio w małych probówkach, odczytane wartości zanotowano w tabeli 1.,

g)    Przelano roztwory z małych probówek do dużych,