6830718946

Laboratorium biochemii

Wpływ temperatury na aktywność enzymów (ćw E)

1.    Cel ćwiczenia

•S Zbadanie wpływu temperatury na aktywność enzymów na przykładzie reakcji hydrolizy przez inwertazę zawartą w wyciągu drożdżowym.

S Zapoznanie się z jedną metod oznaczania stężenia cukrów redukujących- metodą Nelsona.

2.    Odczynniki

S Roztwór inwertazy z wyciągu drożdżowego - enzym,

S 2% roztwór wodny sacharo zy -substrat,

S 0,005% roztwór wodny glukozy - standard (produkt],

S 1/15 bufor fosforanowy o pH 5,6,

^ Odczynnik miedziowy A (2,4% NaKCUH^e, 5%NaHC0₃,4%Na₂C0₃,3,6% K2C2O4]

■S Odczynnik miedziowy B (1,3% CuS04‘5H₂0],

Odczynnik arseno-molibdenowy (5% (NH4}ćMo7024-4H20, 4% H2SO4,0.6% Na₂HAs0₄-7H₂0]

3.    Szkło i aparatura

S Probówki kalibrowane,

S Probówki chemiczne,

S Pipety automatyczne oraz tipsy,

S Parafilm,

•S Kuwety,

S Specol,

S Termostat nastawiony na 40°C,

S Termostat nastawiony na 55°C,

■S Łaźnia z lodem(4°C]

S Zlewka i piecyk elektryczny do przygotowania łaźni wodnej na 100°C.

4.    Wykonanie ćwiczenia

1. Przygotowanie krzywej standardowej:

a]    Przygotowano 26 suchych probówek chemicznych i podpisano je zgodnie z tabelami 1 i 2 oraz łaźnię wodną na 100°C.

b]    Przygotowano odczynnik miedziowy do oznaczania stężenia glukozy: zmieszano 6 ml odczynnika A z 6 ml odczynnika B.

c]    Do 16 probówek kalibrowanych, które ponumerowano zgodnie z tabelą 1, odmierzono po 0,5ml odczynnika miedziowego i pozostawiono do dalszej części ćwiczenia.

d]    Do probówek 1-6 odmierzono 0,005% standardu glukozy zgodnie z tabelą 1.

e]    Roztwory glukozy uzupełniono wodą destylowaną do 0,5ml zgodnie z tabelą 1.

2. Badanie wpływu temperatury na aktywność inwertazy: