3893820142

2.    Badanie zmian ekspresji genu H1.3 pod wpływem stresu zaciemnienia.............20

Wstęp    20

Izolacja DNA    20

Amplifikacja fragmentu DNA metodą PCR    20

Gcnotypowanie roślin    21

Sztuczne mikroRNA..............................................................................................................22

Izolacja RNA    23

RT-PCR    23

Matrycowy RNA    23

Odwrotna transkrypcja    24

Pol ilości owy RT-PCR    24

Opis doświadczenia    24

Cel doświadczenia    24

Schemat doświadczenia    24

Dzień 1 Izolacja DNA genomowego na małą skalę, gcnotypowanie roślin (ok 4 godz )    25

Dzień 2 i 3 Izolacja całkowitego RNA    26

Dzień 4 Synteza jednoniciowego cDNA    27

Dzień 5 Połilościowy multiplex PCR    28

łilektroforeza DNA w żelu agarozowym    28

3.    Badanie oddziaływań białek - drożdżowy system dwuhybrydowy......................29

Zastowowanie systemu dwuhybrydowego.............................................................................................29

Ograniczenia metody.........................................................................................................................30

Charakterystyka analizownych białek ...................................................................................................31

AtSW'!3B    31

FCA    31

Test dwuhybrydowy    31

Schemat doświadczenia    31

Dzień 1 Izolacja DNA plazmidowego z bakterii    32

Izolacja DNA plazmidowego na małą skalę (minilizaty)    32

Dzień 2 Transformacja drożdży    33

Przygotowanie do wykonania testu dwuhybrydowego...........................................................................34

Dzień 1. Test dwuhybrydowy.................................................................................................................34

4.    Wybrane substancje chemiczne stosowane podczas ćwiczeń................................36

Zasady prowadzenia zeszytu laboratoryjnego...........................................................43

Literatura.......................................................................................................................43