5783290843

albo wykorzystać takie metody detekcji, które pozwalają na wyznaczenie bezwzględnej wartości masy molekularnej.

PRZYGOTOWANIE PRÓBKI (USUNIĘCIE FRAKCJI WOSKÓW Z ZASTOSOWANIEM SPE), KONTROLA OBECNOŚCI SACHAROZY I OZNACZENIE ZAWARTOŚCI PODSTAWOWYCH CUKRÓW W MIODZIE METODĄ HPLC - RID /NH2

Próbkę miodu o masie 0,5 g rozpuścić w 5 cm3 wody. Roztwór miodu przesączyć przez kolumienkę SPE typu C18 w celu usunięcia wosków i steroli. Kolumienkę przed użyciem należy kondycjonować ok. 10 ml fazy ruchomej (acetonitryl : woda 80:20 v/v). Po naniesieniu badanego roztworu na kolumienkę, należy dodatkowo przepłukać ją 10 ml wody do HPLC. Tak przygotowany roztwór rozcieńczyć 8 - krotnie i poddać analizie chromatograficznej.

WARUNKI ROZDZIELANIA

Przepływ fazy ruchomej - 1.2 ml / min Temperatura pokojowa Ciśnienie - ok. 90 atm.

WYKONANIE ĆWICZENIA 1. Wzorcowanie

a) . Sporządzić roztwory cukrów (glukoza, fruktoza, sacharoza) o stężeniu ok. 4mg/ml oraz 2 mg/ml każdego z wzorców

b) . Ustawić stałą prędkość przepływu eluentu (acetonitryl :woda 80:20v/v) - 1,2 ml / min.

c) . Ustabilizować warunki rozdzielania po zapewnieniu wypełnienia kanału odniesienia detektora RI aktualnie stosowanym eluentem (konieczne uzyskanie stabilnej linii podstawowej detektora - wahania wskazań na wyświetlaczu mniejsze od 0,2 jednostek względnych);

d) . Po ustaleniu warunków oznaczania, nastrzyknąć kolejno roztwory wzorcowych cukrów

e) . Zarejestrować chromatogramy oraz odczytać powierzchnię piku każdego wzorca.

3. Wykonanie oznaczenia

a) . Wprowadzić do aparatu odpowiednią objętość roztworu miodu przygotowanego zgodnie z procedurą opisaną powyżej

b)    Zarejestrować chromatogramy oraz odczytać powierzchnie wszystkich pików OPRACOWANIE WYNIKÓW

a) . Sporządzić wykres zależności stężenia wyrażonego w mg / ml od powierzchni wyznaczonej dla każdego wzorca cukru tj. glukozy, fruktozy i sacharozy

b) . Na postawie uzyskanych krzywych kalibracyjnych wyznaczyć zawartość poszczególnych cukrów w próbkach miodu wyrażoną w % masowych

c) . Wyznaczyć całkowitą zawartość cukrów w próbce, wyrażoną w % masowych, przez zsumowanie zawartości poszczególnych cukrów w próbce.

13