Morfologia drobnoustrojów. Metody

stosowane w diagnostyce

mikrobiologicznej – metody

barwienia.

Techniki przygotowania preparatu

• Przyżyciowe (preparat natywny)

– służą do oceny:

• ruchliwości

• żywotności

– zawiesina drobnoustrojów w wodzie lub soli fizjologicznej

• w kropli spłaszczonej – na szkiełku podstawowym

• w kropli wiszącej – na szkiełku z komorą Lindnera

• Preparaty przyżyciowe

Przygotowanie preparatu

Barwienie preparatu

Ocena mikroskopowa

Techniki przygotowania preparatu

Techniki przygotowania preparatu

• Przyżyciowe (preparat natywny)

– Barwienie:

• barwienie błękitem metylenowym - pozwala ocenić żywotność

drożdży; barwnik przenika do wnętrza martwej komórki, która

barwi się na ciemnoniebiesko

• barwienie płynem Lugola umożliwia wykrycie w komórce drożdży

substancji zapasowych – glikogenu, który barwi się na brunatno, a

cytoplazma komórki jasnożółto

Techniki przygotowania preparatu

• Preparaty utrwalone

Przygotowanie preparatu

Utrwalenie preparatu

Barwienie preparatu

Ocena mikroskopowa

Metody utrwalania preparatu

• Fizyczne:

– temperatura

• Chemiczne:

– etanol

– metanol

– formalina

– pary kwasu osmowego

Techniki przygotowania preparatu

Metody utrwalania preparatu

• Cel utrwalenia:

– zabicie drobnoustrojów

– ułatwienie wniknięcia barwnika do wnętrza komórki

– zwiększenie przylegania drobnoustrojów do powierzchni

szkiełka

– denaturacja białek – zapobieganie autolizie struktur

wewnątrzkomórkowych

Techniki przygotowania preparatu

Cel barwienia

 Wykazanie obecności bakterii w badanym materiale

 Określenie kształtu i układu przestrzennego komórek

 Zabicie drobnoustrojów – bezpieczeństwo pracy

Techniki przygotowania preparatu

BARWNIKI – CHROMOGENY

STOSOWANE W DAGNOSTYCE

MIKORBIOLOGICZNEJ

KWAŚNE

posiadają jon ujemny

Eozyna

Fuksyna kwaśna

Nigrozyna

ZASADOWE

posiadają jon dodatni

Błękit metylenowy

Fuksyna zasadowa

Czerwień obojętna

Fiolet krystaliczny

Metody barwienia

Metody barwienia

Proste

Pozytywne

Negatywne

Złożone

Pozytywne

Pozytywno-negatywne

Metody barwienia

• Proste - pozytywne:

• Metoda Löfflera z błękitem metylenowym (niebieskie)

• Safranina (czerwone)

• Proste - negatywne

• Nigrozyną / tuszem chiński

Metody barwienia

• Złożone pozytywno – negatywne

• barwienie otoczek

wg Burri – Ginsa

• barwienie przetrwalników

wg Dornera

Metody barwienia

 Złożone - pozytywne

 Metoda Neissera

 Metoda Waysona

 Metoda Wirtza-Conklina

do barwienia przetrwalników

 Ziehl – Neelsena

- barwienia bakterii kwasoopornych

 Kinyoun – Gabett’a

- barwienie bakterii kwasoopornych

 Metoda Grama

Bakterie
Gram-dodatnie

Bakterie
Gram-ujemne

Schemat barwienia bakterii metodą Grama

Utrwalenie

preparatu

Fiolet krystaliczny

Płyn Lugola

Odbarwienie

roztworem

alkoholu

Fuksyna zasadowa

2-3’

1-2’

30-60’’

30-60’’