2012-03-11

1

1

WYKRYWANIE



-LAKTAMAZ

O ROZSZERZONYM SPEKTRUM

SUBSTRATOWYM (ES



L)

METODY FENOTYPOWE STOSOWANE

W OZNACZANIU ES



L

WG. CLSI

(

ang. Clinical and Laboratory Standard Institute)

METODA DWÓCH KRĄŻKÓW

(DDST)

ETEST

PODŁOŻA CHROMOGENNE

(chromID ESBL)

SYSTEMY AUTOMATYCZNE

(VITEK 2 , PHOENIX)

2

3

OZNACZANIE ES



L

WG CLSI

(

Klebsiella pneumoniae

,

K. oxytoca,

Escherichia coli,

and

Proteus mirabilis

)

4

TEST PRZEGLĄDOWY WSTĘPNY

Klebsiella pneumoniae

ATCC 700603, Szczep ESBL+;

strefa



22 mm

(17 mm)

strefa



27



27 mm

strefa



25

2012-03-11

2

5

Ceftazydym 30



g

9 mm

Ceftazydym+kwas

klawulanowy 30/10



g

25 mm

Cefotaksym 30



g

20 mm

Cefotaksym+kwas

klawulanowy 30/10



g

35 mm

TEST POTWIERDZAJĄCY

POZYTYWNY DLA ES



L

>= 5mm

>= 5mm

6

Ceftazydym 30



g

9 mm

Ceftazydym+kwas

klawulanowy 30/10



g

12 mm

Cefotaksym 30



g

15 mm

Cefotaksym+kwas

klawulanowy 30/10



g

17 mm

< 5mm

TEST POTWIERDZAJĄCY

NEGATYWNY DLA ES



L

7

OZNACZANIE ES



L

METODĄ

DWÓCH KRĄŻKÓW

8

METODA DWÓCH KRĄŻKÓW

WYNIK POZYTYWNY DLA ES



L

(

Klebsiella pneumoniae 639/1)

2012-03-11

3

9

METODA DWÓCH KRĄŻKÓW

WYNIK POZYTYWNY DLA ES



L

(

Serratia marcescens p850)

10

METODA DWÓCH KRĄŻKÓW

WYNIK POZYTYWNY DLA ES



L

(

Klebsiella pneumoniae ATTC 700603)

11

METODA DWÓCH KRĄŻKÓW

WYNIK POZYTYWNY DLA ES



L

(

E. coli 696/2)

12

WYKRYWANIE ESBL

W OBECNOŚCI

CEFALOSPORYNAZY AmpC

2012-03-11

4

13

METODA DWÓCH KRĄŻKÓW + FEP (derepresja AmpC)

WYNIK POZYTYWNY DLA ES



L

(

Enterobacter cloaceae MIKROBANK 10.011)

14

W przypadku E. coli

AmpC+, w rutynowej diagnostyce, nie można powiedzieć, czy

jest to nadekspresja naturalnej, czy wytwarzanie nabytej AmpC

E. coli

ESBL+

AmpC+

METODA DWÓCH KRĄŻKÓW (DDST) WARIANT PODSTAWOWY

METODA DWÓCH KRĄŻKÓW (DDST)

Z DODATKIEM CEFEPIMU

METODA DWÓCH KRĄŻKÓW (DDST) NA PODŁOŻU Z

KLOKSACYLINĄ

15

OZNACZANIE ES



L

METODĄ

ETEST

16

ETEST ES



L -

WYNIK POZYTYWNY

MIC CT/CTL =1.5/0.047 = 32

2012-03-11

5

17

ETEST ES



L -

WYNIK POZYTYWNY

MIC TZ/TZL = 32/0.38=84

18

ETEST ES



L -

WYNIK POZYTYWNY

OKRĄGŁA STREFA „FANTOMOWA”

PONIŻEJ CT WSKAZUJE NA OBECNOŚĆ

ES



L

ETEST ES



L -

WYNIK POZYTYWNY

DEFORMACJA STREFY WOKÓŁ TZ

WSKAZUJE NA OBECNOŚĆ ES



L

19

20

chromID ESBL

2012-03-11

6

21

chromID ESBL

E. coli

TEM-3



-gal (-)

E. coli

CTX-M-14



-gal (+)

Jordi Vila, ESCMID Postgraduate Education CourseAnkara, Turkey 10-11 March 2009

22

chromID ESBL

E. cloacae

CTX-M-1

K. pneumoniae

SHV-5

Jordi Vila, ESCMID Postgraduate Education CourseAnkara, Turkey 10-11 March 2009

23

MBL

(ANG. METALO-



-LACTAMASES)

24

TEST ZBLIŻENIOWY

imipenem 10



g

ceftazydym 30



g

2 cm

2 cm

CAZ

IMI

10



l

MEM

EDTA

meropenem 10



g

2

c

m

EDTA (10 µl 0,5 M EDTA o pH 7,3-7,4)

2012-03-11

7

25

IPM

EDTA

Gian Maria Rossolini 2008

26

TEST KOMBINOWANY

IMIPENEM 10



g

I IMIPENEM 10



g + 5 µl 0,5 M

EDTA o pH 7,3-7,4

MEROPENEM 10



g

I MEROPENEM 10



g + 5 µl 0,5 M

EDTA o pH 7,3-7,4

27

imipenem 10



g

IMI

EDTA

IMI

MEM

EDTA

MEM

meropenem 10



g

imipenem 10



g

+ 5 µl EDTA

meropenem 10



g

+ 5 µl EDTA

TEST KOMBINOWANY

28

IPM

IPM+EDTA

Gian Maria Rossolini 2008

2012-03-11

8

29

KPC

(

Klebsiella pneumoniae carbapenemase)

30

ZDOLNE DO HYDROLIZY

WSZYTKICH



-LAKTAMÓW

KPC

(

K. pneumoniae carbapenemase)

31

imipenem 10



g

IMI

IMI

MEM

MEM

meropenem 10



g

imipenem 10



g

+ 20



l KWASU

FENYLOBORONOWEGO

meropenem 10



g

20



l KWASU

FENYLOBORONOWEGO

TEST KOMBINOWANY

32

TEST KOMBINOWANY

K. pneumoniae KPC-2. (A) Ertapenem 10 (B)

ertapenem + KFB; (C) meropenem 10 g; (D)

meropenem KFB

Ertapenem 10



g

meropenem 10



g

ertapenem10



g

+ 20



l KWASU

FENYLOBORONOWEGO

meropenem 10



g

20



l KWASU

FENYLOBORONOWEGO

Yohei Doi 2008

>=5mm